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Tutte le procedure che coinvolgono modelli animali sono state esaminate dal comitato istituzionale locale per la cura degli animali e dal comitato di revisione veterinaria JoVE.
1. Materiali
- Preparazione dell'iniezione di LPS
- Aggiungere 25 mL di acqua distillata a 25 mg di polvere di LPS derivata da Salmonella typhimurium a una concentrazione finale di 1 mg/mL. Conservare l'iniezione in una provetta sterile a 4 °C.
cautela: L'LPS è tossico.
2. Animali
- Somministrare LPS a ratti maschi di Sprague-Dawley (SD), di età pari o superiore a 10 settimane (peso medio: 280 ± 20 g) mediante iniezione intraperitoneale.
cautela: Se i ratti vengono acquistati da un'altra organizzazione, la fase di adattamento non dovrebbe essere inferiore a 7 giorni.
3. Iniezioni LPS
- Iniettare LPS per via intraperitoneale in ciascun ratto alla dose di 1 mg/kg e riportare i ratti nella loro gabbia di casa.
nota: L'anestesia non è necessaria.
- Sei ore dopo, iniettare la stessa dose di iniezione di LPS nei ratti.
- Sedici ore dopo iniettare la stessa dose di LPS nei ratti.
cautela: L'iniezione di LPS nei ratti SD alla dose di 1 mg/kg può comportare un tasso di mortalità del 5%. Il tasso di mortalità potrebbe aumentare ulteriormente nei ratti più giovani o più anziani o nelle femmine di ratto gravide.
- Riportare i ratti nelle loro gabbie dopo l'iniezione di LPS e fornire l'accesso ad libitum a cibo e bevande.
nota: I ratti mostreranno una distinta risposta infiammatoria sistemica e quindi le gabbie devono rimanere pulite durante l'esperimento. I ratti devono essere monitorati frequentemente (2 volte al giorno) per il peso, l'aspetto generale e l'atteggiamento dopo la prima iniezione di LPS. Se i ratti iniziano a mostrare una postura curva, riluttanza a muoversi, significativa perdita di peso (>20%) o colorazione di porfirina, dovrebbero essere soppressi umanamente prima dell'endpoint dello studio di 7 giorni.