Induzione di microemorragie cerebrali in un modello di ratto utilizzando lipopolisaccaride

Abstract

Fonte: Li, D., et al. Microemorragie cerebrali subacute indotte da iniezione di lipopolisaccaridi nei ratti. J. Vis. Exp. (2018).

Questo video dimostra il processo di induzione dell'interruzione della barriera emato-encefalica (BBB) e delle microemorragie cerebrali in un modello di ratto utilizzando lipopolisaccaride (LPS). Evidenzia la sequenza delle risposte immunitarie che portano ad un aumento della permeabilità della BBB e al conseguente danno al tessuto cerebrale.

Protocollo

Tutte le procedure che coinvolgono modelli animali sono state esaminate dal comitato istituzionale locale per la cura degli animali e dal comitato di revisione veterinaria JoVE.

1. Materiali

1. Preparazione dell'iniezione di LPS
   1. Aggiungere 25 mL di acqua distillata a 25 mg di polvere di LPS derivata da Salmonella typhimurium a una concentrazione finale di 1 mg/mL. Conservare l'iniezione in una provetta sterile a 4 °C.
      cautela: L'LPS è tossico.

2. Animali

1. Somministrare LPS a ratti maschi di Sprague-Dawley (SD), di età pari o superiore a 10 settimane (peso medio: 280 ± 20 g) mediante iniezione intraperitoneale.
   cautela: Se i ratti vengono acquistati da un'altra organizzazione, la fase di adattamento non dovrebbe essere inferiore a 7 giorni.

3. Iniezioni LPS

1. Iniettare LPS per via intraperitoneale in ciascun ratto alla dose di 1 mg/kg e riportare i ratti nella loro gabbia di casa.
   nota: L'anestesia non è necessaria.
2. Sei ore dopo, iniettare la stessa dose di iniezione di LPS nei ratti.
3. Sedici ore dopo iniettare la stessa dose di LPS nei ratti.
   cautela: L'iniezione di LPS nei ratti SD alla dose di 1 mg/kg può comportare un tasso di mortalità del 5%. Il tasso di mortalità potrebbe aumentare ulteriormente nei ratti più giovani o più anziani o nelle femmine di ratto gravide.
4. Riportare i ratti nelle loro gabbie dopo l'iniezione di LPS e fornire l'accesso ad libitum a cibo e bevande.
   nota: I ratti mostreranno una distinta risposta infiammatoria sistemica e quindi le gabbie devono rimanere pulite durante l'esperimento. I ratti devono essere monitorati frequentemente (2 volte al giorno) per il peso, l'aspetto generale e l'atteggiamento dopo la prima iniezione di LPS. Se i ratti iniziano a mostrare una postura curva, riluttanza a muoversi, significativa perdita di peso (>20%) o colorazione di porfirina, dovrebbero essere soppressi umanamente prima dell'endpoint dello studio di 7 giorni.

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Lps	Sigma-Aldrich	L-2630	per induzione di infiammazione
Soluzione salina tampone fosfato (PBS)	Distretto di Solarbio	P1022	Un tipo di soluzione tampone comunemente usata negli esperimenti