Un modello in vitro di lesione da stiramento in neuroni derivati da cellule staminali pluripotenti indotte umane

Abstract

Fonte: Phillips, J. K. et al. Metodo per la lesione da stiramento ad alta velocità di neuroni derivati da cellule staminali pluripotenti indotte umane in un formato a 96 pozzetti. J. Vis. Exp. (2018)

Questo video dimostra il processo di induzione della lesione da stiramento su neuroni derivati da cellule staminali pluripotenti indotte umane (hiPSCN). Le cellule vengono prelevate in una piastra multipozzetto senza fondo con una membrana di silicone attaccata. Lo stress meccanico controllato viene applicato sulla membrana per indurre l'interruzione del citoscheletro e il danno alla membrana cellulare, inducendo un fenotipo di lesione da stiramento nelle cellule.

Protocollo

1. Fabbricazione di piastre

1. Trattare al plasma una piastra da 96 pozzetti con un pulitore al plasma da 200 W (vedere la Tabella dei materiali) per 60 secondi ad alta potenza, posizionandola con il lato inferiore rivolto verso l'alto all'interno del pulitore al plasma. Verificare la presenza di un bagliore viola visibile attraverso la finestra della camera, che indica che si è formato un plasma efficace. Questa tecnica di legame è adattata da Sunkara et al.
2. Entro 60 s, immergere la parte superiore della piastra in 200 ml di trietossisilano all'1,5% (3-amminopropil) (APTES) in acqua deionizzata (DI) per 20 minuti,....

Risultati

Figura 1: Uno schema etichettato del dispositivo per lesioni.(A) vista dall'alto, (B) vista isometrica, (C) vista frontale, (D) vista laterale destra. La barra della scala si applica alle viste ortogonali (A, B e D).

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Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
.010" Foglio di silicone	Produzione specializzata, Inc	#70P001200010	Foglio di polidimetilsilossano (PDMS)
Sparkleen	Fisher Scientifico	#043204
Nunc 256665	Fisher Scientifico	#12-565-600	Piastra a 96 pozzetti senza fondo
Salviette Kim	ULINE	S-8115
Pulitore al plasma	Harrick Plasma	#PDC-001-HC
(3-amminopropil) trietossisilano	Sigma-Aldrich	#440140	APTES
Carta pergamena	Reynolds	N/A
Luce a cupola	CCS inc	LFX2-100SW
Alimentatore per luce a cupola	CCS inc	PSB-1024VB
Unità di illuminazione diffusa assiale	Siemens	Nerlite DOAL-75-LED	Luce assiale diffusa
Array di LED ad alta potenza	Cree	XLamp CXA2540	Array di LED ad alta potenza
Supporto LED	Molex	1807200001	Supporto LED
Alimentazione LED	Significa bene	HLG-320H-36B	Alimentatore a corrente costante
Software FastCam Viewer	Fototrone		camera softeware
Fastcam Mini UX50	Fototrone	N/A	Telecamera ad alta velocità
Micro-NIKKOR 105mm f/2.8	Nikon	#1455	Obiettivo della fotocamera ad alta velocità
0,1 mg/mL di poli-L-ornitina	Sigma-Aldrich	#P4597
iCelle	Dinamica cellulare internazionale	#NRC-100-010-001
Supporti iCell	Dinamica cellulare internazionale	#NRM-100-121-001
Integratore iCell	Dinamica cellulare internazionale	#NRM-100-031-001
Laminina	Sigma-Aldrich	#L2020
attuatore a bobina mobile	BEI Kimco	LA43-67-000A
encoder lineare ottico	Renishaw	T1031-30A
servoazionamento	Controlli Copley	Xenus XTL
controllore	Strumenti nazionali	Controller PowerPC in tempo reale cRIO 9024
Telaio cRIO	Strumenti nazionali	cRIO 9113
Modulo di ingresso digitale	Strumenti nazionali	NI 9411
Telaio di acquisizione dati	Strumenti nazionali	NI 9113
LabVIEW	Strumenti nazionali
hiPSCN	Dinamica cellulare internazionale