Stabilire un modello murino di neuropatia delle piccole fibre utilizzando la resiniferatossina

Abstract

Fonte: Lee, Y. et al., Stabilire un modello murino di una neuropatia pura delle piccole fibre con l'agonista ultrapotente del potenziale recettore transitorio Vanilloide di tipo 1.J. Vis. Exp.(2018).

Questo video mostra un metodo per stabilire un modello di neuropatia a piccole fibre nei topi utilizzando l'agonista TRPV1 resiniferatossina (RTX). Delinea i passaggi coinvolti nella somministrazione di RTX ai topi e spiega come RTX induce la morte neuronale nei neuroni sensoriali di piccolo diametro, stabilendo così il modello di neuropatia.

Protocollo

Tutte le procedure che coinvolgono modelli animali sono state esaminate dal comitato istituzionale locale per la cura degli animali e dal comitato di revisione veterinaria JoVE.

1. Instaurazione della neuropatia da resiniferatossina (RTX)

ATTENZIONE: RTX è neurotossico e pericoloso. Al contatto, agisce come irritante per gli occhi, le mucose e le vie respiratorie superiori. Evitare l'inalazione e indossare occhiali da laboratorio e camici durante la preparazione RTX. Sciacquare abbondantemente con acqua in caso di contatto con la pelle o dopo la manipolazione.

1. Aggiungere 1 mg di polvere RTX a una miscela da 200 μl di uguale volume di Tween 80 ed etanolo assoluto (100 μl per ciascun solvente).
2. Aliquotare la soluzione RTX (12 μL/flaconcino) e conservarla a -20 °C per un massimo di 3 mesi. Questo costituisce il titolo RTX; scartare la soluzione RTX rimanente alla scadenza.
3. Diluire il brodo RTX con soluzione fisiologica normale fino a un volume finale di 600 μl. La concentrazione finale della soluzione RTX dovrebbe essere dello 0,01%, che equivale a 1 μg di RTX in una soluzione per veicoli da 10 μL.
4. Utilizzare topi ICR maschi adulti di 8 settimane (35-40 g) come animali da esperimento e somministrare ai topi una singola dose di soluzione RTX (dose: 200, 50 e 10 μg/kg, rispettivamente) per via intraperitoneale (i.p.) con una siringa per microiniezione. I topi sono stati anestetizzati mediante inalatore con isoflurano al 5% per anestesia profonda. Se i topi hanno mostrato un'azione di astinenza delle estremità durante l'iniezione di RTX, i topi dovrebbero inalare più a lungo l'anestesia.
   Esempio: se il topo pesa 40 g, riceverà 20 μl della soluzione RTX, che rappresenta la dose di 50 μg/kg.
5. Somministrare a un gruppo di topi un volume uguale di veicolo (10% Tween 80 e 10% etanolo assoluto in soluzione salina) come controllo.
6. Dopo l'iniezione di RTX, rimetti i topi in una gabbia di plastica con un ciclo di 12 ore luce/12 ore di buio e fornisci cibo e acqua ad libitum.

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Reagente chimico
Resiniferatossina	sigma	R8756
Interpolazione 80	sigma	P1754