Una tecnica per infliggere una lesione cerebrale traumatica a testa chiusa nelle mosche della Drosophila

In questo articolo

Abstract

Fonte: Sun, M., et al. Un nuovo metodo per modellare l'encefalopatia traumatica cronica in Drosophila. J. Vis. Exp. (2017).

Questo video mostra una procedura per infliggere una lesione traumatica a testa chiusa nelle mosche Drosophila anestetizzate utilizzando un dispositivo di sciopero con un impattatore a gas. La lesione influisce sulla funzione neuronale e compromette la capacità di camminare.

Protocollo

1. Assemblaggio del dispositivo di incontro (Figura 1)

Rimuovere lo stantuffo da una siringa di tubercolina da 1 mL. Tagliare il fusto a 1 ml.
Rimuovere una barriera aerosol (3 mm di altezza x 4 mm di diametro) da un puntale per pipette da 200 μl e utilizzarla come impattatore. Posizionare l'impattatore all'interno del cilindro della siringa. Picchiettare delicatamente la canna per spostare l'impattatore verso l'estremità della punta, con il lato piatto che copre l'apertura dell'ugello.
Collegare l'estremità della punta del cilindro a un tubo di plastica collegato al regolatore di flusso di anidride carbonica (CO₂) di una stazione di anestesia Drosophila.
Tenere la canna verticalmente e fissarla a un supporto standard in modo che l'impattatore rimanga nella parte inferiore della canna.
Modificare un puntale per pipetta da 200 μl per renderlo il portamosche.
1. Tagliare a 4 mm dalla punta per creare un'apertura di 0,8 mm di diametro, lasciando esposta solo la testa della mosca.
  NOTA: Il torace e tutte le altre parti del corpo della mosca rimarranno all'interno della punta della pipetta.
Modificare un puntale per pipetta da 1.000 μl e un cappuccio dell'ago della siringa da 1 ml per creare il connettore.
1. Tagliare a 44 mm dall'apertura della punta. Prendere un cappuccio dell'ago per siringa da 1 ml della lunghezza di 6 mm e spingerlo saldamente nel segmento rimanente del puntale della pipetta da 1.000 μl.

2. Funzionamento del dispositivo di sciopero

Anestetizzare una singola mosca femmina adulta di 2 giorni usando CO₂ su un cuscinetto antimosche.
Trasferiscilo delicatamente sul portamosche usando una spazzola fine. Picchiettare delicatamente il supporto in modo che la testa della mosca sia visibile all'esterno dell'estremità della punta. Se la proboscide della mosca è esposta all'esterno della punta, infilarla delicatamente all'interno della punta con un ago da siringa smussato da 1 ml.
nota: Assicurati di tenere la proboscide all'interno del supporto. In caso contrario, la mosca potrebbe morire a causa di una lesione da proboscide da succhiare.
Serrare il supporto della mosca al cilindro della siringa con il connettore in modo che la testa della mosca sia rivolta verso il basso.
Impostare la pressione del gas su 100 kPa. Regolare la portata in base al disegno dell'esperimento.
Accendere e spegnere rapidamente l'interruttore a levetta del regolatore di flusso in modo che l'impattatore colpisca una volta la testa della mosca.
Sollevare il portamosche e spostarlo su un cuscinetto per mosche. Invertire il supporto della mosca e picchiettare delicatamente il lato per far uscire la mosca. Lasciare la mosca in una fiala vuota per riprendersi.

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Risultati

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Figura 1. Schema del dispositivo di sciopero. Il dispositivo utilizzava materiali facilmente reperibili in un laboratorio di Drosophila: 1) puntale per pipetta da 200 μl, 2) siringa per tubercolina da 1 ml, 3) impattatore, 4) tubo di collegamento agganciato a una stazione di anestesia per Drosophila e 5) connettore per serrare il puntale sulla siringa.