Tutte le procedure che coinvolgono modelli animali sono state esaminate dal comitato istituzionale locale per la cura degli animali e dal comitato di revisione veterinaria JoVE.
1. Modello murino di lesione cerebrale neonatale HI
- Anestetizzare i cuccioli con isoflurano.
- Metti i cuccioli (meno di 5) in una scatola di anestesia e chiudi il coperchio.
- Accendere il sistema di anestesia per circa 15 minuti; regolare il gas e l'isoflurano utilizzando una macchina per anestesia da tavolo. Regolare il flussometro di ossigeno a 1,5 L/min. Regolare il vaporizzatore di isoflurano al 3-5% per l'induzione dell'anestesia.
- Dopo 15 minuti, regolare il vaporizzatore di isoflurano all'1-2% per il mantenimento dell'anestesia.
- Metti un cucciolo completamente anestetizzato sotto un microscopio da dissezione (l'addome rivolto verso il ricercatore) e fissalo con del nastro adesivo.
- Praticare un'incisione di ~0,7 mm nel collo usando forbici sterilizzate.
- Rimuovere con cura il tessuto adiposo utilizzando una pinza sterilizzata ed esporre l'arteria carotide destra unilaterale.
- Legare l'arteria carotide destra unilaterale con una sutura riassorbibile 5-0.
- Sutura l'incisione nel collo con sutura 5-0.
- Metti ogni cucciolo in una camera ipossica calda a 37 °C per 1 ora per il recupero. Non chiudere il coperchio della camera.
- 1 ora dopo l'intervento, quando i cuccioli sono completamente svegli, chiudere il coperchio della camera di ipossia e diminuire i livelli di gas per stabilire le condizioni di ipossia (8% O2 e 92% N2).
- Dopo 90 minuti di ipossia, riporta i cuccioli nelle loro gabbie.
- Una settimana dopo la lesione cerebrale HI, ripetere il passaggio 1.
- Dopo l'anestesia, praticare un'incisione nel cuoio capelluto con forbici e pinze sterilizzate per identificare la lesione cerebrale nell'area posterolaterale dell'emisfero destro><.
nota: Questo trattamento induce ipossia nei cuccioli. La presenza e l'entità della lesione cerebrale in tutti i topi viene valutata visivamente ad occhio nudo attraverso il cranio semitrasparente. A seconda delle dimensioni o del volume dello scolorimento (cioè la lesione cerebrale), i cuccioli sono classificati in gruppi. Se non vi è alcuna lesione corticale visibile, il topo viene classificato nel gruppo "nessuna lesione corticale". Se c'è una lesione corticale visibile (cioè una lesione nell'emisfero destro), il topo viene classificato nel gruppo delle "lesioni corticali". Poiché la classificazione dei topi in gruppi viene effettuata una settimana dopo l'operazione, i raggruppamenti possono essere modificati quando le morfologie dei campioni cerebrali sono chiaramente definite al momento del sacrificio.
