Generazione di un modello murino con un'infezione del sistema nervoso centrale

Abstract

Fonte: Shen, T., et al. Un modello murino di malattia simile all'encefalite virale acuta indotta dal virus della dengue. J. Vis. Exp. (2019)

Questo video dimostra la generazione di un modello murino con un'infezione del SNC. A un cucciolo da latte viene iniettato il virus sia per via intracranica che intraperitoneale. Il virus si diffonde, infettando il SNC causando la morte delle cellule neuronali e l'infiammazione. Il cucciolo viene valutato per i sintomi dell'infezione man mano che la malattia progredisce.

Protocollo

Tutte le procedure che coinvolgono modelli animali sono state esaminate dal comitato istituzionale locale per la cura degli animali e dal comitato di revisione veterinaria JoVE.

1. Procedura di infezione

1. Preparare stock di DENV2 non adattati (ceppo PL046)9 (originariamente ottenuti dai Centers for Disease Control di Taiwan, che vanno da 2,5 x 10⁷ a 1 x 10⁹ PFU/mL).
2. Diluire lo stock virale a 1 x 10⁶ PFU con terreno del Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640 fino a un volume totale di 40 μl.
3. Riempire una siringa da 0,3 ml dotata di un ago da 30 G con 10 μl (2,5 x 10⁵ PFU) di virus diluito e riempire un'altra siringa da 0,3 ml dotata di un ago da 30 G con 30 μl (7,5 x 10⁵ PFU) di virus diluito.
4. Tenere in mano il topo lattante ICR (Institute of Cancer Research) di 7 giorni ed eseguire i seguenti passaggi.
   1. Per l'iniezione intracerebrale, tenere il topo in posizione prona premendo il padiglione auricolare tra l'indice e il pollice e iniettare intracerebralmente 10 μL di virus diluito nell'area lambda, il punto all'intersezione della sutura sagittale e lambdoidea.
   2. Dopo l'iniezione intracerebrale, tenere il topo in posizione supina usando l'indice e il pollice e iniettare delicatamente 30 μL di virus diluito per via intraperitoneale nell'addome murino.
      nota: Per evitare il cannibalismo, viene utilizzato alcol al 75% per creare una perdita temporanea della sensazione olfattiva della madre. Inoltre, si consiglia di coprire la cucciolata con le feci e l'urina della madre.
5. Rimetti i topi lattanti nelle loro gabbie e attendi 5 minuti per verificare la loro sicurezza dopo la stimolazione con l'avidità dei topi, inclusa la camminata e la suzione del latte materno><. nota: Molto spesso, i topi dimostrano un'attività normale dopo la stimolazione e non sembrano esserci effetti dannosi dopo la sfida tecnica.
6. Valutare i progressi giornalieri dei topi in termini di peso corporeo (utilizzando una bilancia di microgrammi), malattia simile all'encefalite virale acuta (in base al punteggio della malattia come descritto nella sezione 2) e tasso di sopravvivenza.

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Roswell Park Memorial Institute 1640 medio (RPMI)	Gibco	Codice 11875-085	Diluizione del virus
Siringa da insulina da 0,3 ml	BD Ultra-FineII	328838	Iniezione intracerebrale e intraperitoneale
microbilancia	LabX di METTLER TOLEDO	AL104	Peso del mouse
DENV2 non adattato (ceppo PL046)	I Centri per il Controllo delle Malattie di Taiwan	-	Infettare il topo
Istituto di ricerca sul cancro (ICR) topo lattante	BioLASCO Taiwan Co., Ltd	-	Il nostro modello murino

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