Induzione di encefalomielite autoimmune sperimentale in un modello murino

Abstract

Fonte: Schmitz, K., et al. Bioluminescenza e imaging nel vicino infrarosso della neurite ottica e dell'infiammazione cerebrale nel modello EAE di sclerosi multipla nei topi. J. Vis. Exp (2017).

In questo video, un modello murino di sclerosi multipla viene stabilito utilizzando l'encefalomielite autoimmune sperimentale (EAE). Al topo viene iniettata un'emulsione contenente un peptide neuronale e un adiuvante, innescando una risposta immunitaria che attiva le cellule T autoreattive. Questo è seguito da un'iniezione di tossina della pertosse (PTX) per aumentare la permeabilità della barriera emato-encefalica, consentendo alle cellule T autoreattive di infiltrarsi nel cervello. Questa infiltrazione avvia una cascata di segnalazione che alla fine provoca danni alla mielina, imitando la condizione demielinizzante della sclerosi multipla.

Protocollo

1. Induzione EAE nei topi SJL/J

1. topi
   1. Utilizzare topi femmina SJL/J di 11 settimane e lasciarli abituare alla sala sperimentale per circa 7 giorni. Usa n = 10 topi per gruppo.
   2. Per valutare gli effetti del farmaco, somministrare continuamente il farmaco e il placebo per il gruppo di controllo tramite acqua potabile o pellet di cibo a partire da 3 o 5 giorni dopo l'immunizzazione (n = 10 per gruppo). Durante il picco della malattia, somministrare farmaci o placebo con latte o cornflakes imbevuti di acqua al 3% di zucchero.
2. Materiale per l'immunizzazione
   1. Utilizzare un kit di induzione EAE composto da antigene (peptide della proteina proteolipide, PLP139-151, emulsione da 1 mg/mL) in un'emulsione con adiuvante di Freund completo (CFA, Mycobacterium tuberculosis H37 Ra) ucciso a caldo e 2 fiale (5 μg ciascuna) di tossina pertosse liofilizzata (PTX).
   2. Sciogliere il PTX (2 μg/mL) in 1 soluzione salina tamponata con fosfato (PBS), cioè aggiungere 1,5 mL di PBS a ciascuna provetta PTX, mescolare bene, rimuovere con la stessa punta della pipetta e aggiungere 1 mL di PBS in una provetta da 50 mL); mescolare bene.
3. immunizzazione
   1. Iniettare PLP/CFA per via sottocutanea in 2 porzioni, ciascuna da 100 μL, entrambe alla base della coda.
   2. Iniettare 100 μL di PTX per via intraperitoneale (i.p.) due volte per topo, la prima 1-2 ore dopo l'immunizzazione e la seconda a 24 ore.
   3. Per i topi di controllo, iniettare CFA senza PLP (2 porzioni da 100 μL) più PTX senza PLP.

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Emulsione PLP139-151/CFA	Laboratori Hooke, San Lorenzo, MA	EK-0123	Kit di induzione EAE
Tossina della pertosse	Laboratori Hooke, San Lorenzo, MA	EK-0123	Kit di induzione EAE
IVIS Spettro Lumina	Perkin Elmer, Inc., Waltham, Stati Uniti		Sistema di imaging a bioluminescenza e infrarossi
Software LivingImage 4.5	Perkin Elmer, Inc., Waltham, Stati Uniti	CLS136334	Software di analisi IVIS
Isoflurano	Abbott Labs, Illinois, Stati Uniti	Codice 26675-46-7	anestetico