Generazione di un modello murino di lesione cerebrale traumatica utilizzando un dispositivo a percussione fluida laterale

Tutte le procedure che coinvolgono modelli animali sono state esaminate dal comitato istituzionale locale per la cura degli animali e dal comitato di revisione veterinaria JoVE.

1. Cura degli animali

1. Utilizzare topi maschi C57BL/6J di 5-6 settimane (20-25 g di peso) in questo esperimento.
2. Mantieni i topi su un ciclo luce/buio di 12 ore/12 ore e assicurati che ricevano cibo e acqua ad libitum. Fornire le stesse quantità di cibo e acqua sia al gruppo sham che al gruppo TBI durante lo studio.
3. Fai tutti gli sforzi per ridurre al minimo il dolore e il disagio dell'animale.

2. Induzione di lesioni cerebrali traumatiche

1. Iniettare ketamina (80-100 mg/kg)/xilazina (10 mg/kg) IP per l'anestesia. Testare la profondità dell'anestesia utilizzando un riflesso oculare o un riflesso del dolore. Usa lacrime artificiali o unguento lubrificante per gli occhi per evitare che gli occhi si secchino.
2. Dopo l'anestesia, mettere il mouse in posizione prona. Utilizzare un termoforo a temperatura controllata per mantenere la temperatura a 37 °C durante l'intervento chirurgico e per 30 minuti dopo il trauma cranico.
3. Radere i peli dell'area dell'incisione.
4. Disinfettare il cuoio capelluto con etanolo al 70% utilizzando tre scrub alternati, quindi incidere il cuoio capelluto su un piano sagittale.
5. Usa una pinza per ritrarre l'incisione su entrambi i lati e separare leggermente il periostio.
6. Usa un pennarello per disegnare un cerchio (3 mm di diametro) sull'area parietale destra del cranio, a 2 mm di distanza dalla linea mediana.
7. Forare il cranio con un trapano elettrico. Assicurarsi che questo passaggio sia azionato con attenzione per evitare che la dura madre venga danneggiata.
8. Rimuovere il lembo osseo ed esporre una piccola finestra ossea (3 mm di diametro).
9. Posizionare una cannula di plastica per lesioni (diametro interno = 2,5 mm, lunghezza = 8 mm) sopra la craniotomia e cementare la cannula al cranio utilizzando un acrilico dentale.
10. Riempire la cannula con NaCl sterile allo 0,9% (soluzione fisiologica) utilizzando una siringa (5 mL) per assicurarsi che non vi siano bolle nella cannula.
11. Accendere l'oscilloscopio e l'amplificatore e assicurarsi che il tubo ad alta pressione del dispositivo LFPI sia privo di bolle d'aria. Testare il dispositivo erogando circa 10 impulsi fino a quando non emette un segnale costante. Regolare l'angolo della posizione iniziale del pendolo per raggiungere un'intensità dell'impulso di circa 2,0 atm.
12. Collegare la cannula della lesione al dispositivo LFPI. Indurre lesioni cerebrali premendo il grilletto e rilasciando il pendolo. Quindi, ottenere un impulso e trasmetterlo alla dura madre attraverso l'intero sistema di tubi chiusi riempiti di fluido.
13. Operare i topi del gruppo fittizio con la stessa procedura chirurgica. Non eseguire l'LFPI.