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Tutte le procedure che coinvolgono modelli animali sono state esaminate dal comitato istituzionale locale per la cura degli animali e dal comitato di revisione veterinaria JoVE.
1. Cura degli animali
- Utilizzare topi maschi C57BL/6J di 5-6 settimane (20-25 g di peso) in questo esperimento.
- Mantieni i topi su un ciclo luce/buio di 12 ore/12 ore e assicurati che ricevano cibo e acqua ad libitum. Fornire le stesse quantità di cibo e acqua sia al gruppo sham che al gruppo TBI durante lo studio.
- Fai tutti gli sforzi per ridurre al minimo il dolore e il disagio dell'animale.
2. Induzione di lesioni cerebrali traumatiche
- Iniettare ketamina (80-100 mg/kg)/xilazina (10 mg/kg) IP per l'anestesia. Testare la profondità dell'anestesia utilizzando un riflesso oculare o un riflesso del dolore. Usa lacrime artificiali o unguento lubrificante per gli occhi per evitare che gli occhi si secchino.
- Dopo l'anestesia, mettere il mouse in posizione prona. Utilizzare un termoforo a temperatura controllata per mantenere la temperatura a 37 °C durante l'intervento chirurgico e per 30 minuti dopo il trauma cranico.
- Radere i peli dell'area dell'incisione.
- Disinfettare il cuoio capelluto con etanolo al 70% utilizzando tre scrub alternati, quindi incidere il cuoio capelluto su un piano sagittale.
- Usa una pinza per ritrarre l'incisione su entrambi i lati e separare leggermente il periostio.
- Usa un pennarello per disegnare un cerchio (3 mm di diametro) sull'area parietale destra del cranio, a 2 mm di distanza dalla linea mediana.
- Forare il cranio con un trapano elettrico. Assicurarsi che questo passaggio sia azionato con attenzione per evitare che la dura madre venga danneggiata.
- Rimuovere il lembo osseo ed esporre una piccola finestra ossea (3 mm di diametro).
- Posizionare una cannula di plastica per lesioni (diametro interno = 2,5 mm, lunghezza = 8 mm) sopra la craniotomia e cementare la cannula al cranio utilizzando un acrilico dentale.
- Riempire la cannula con NaCl sterile allo 0,9% (soluzione fisiologica) utilizzando una siringa (5 mL) per assicurarsi che non vi siano bolle nella cannula.
- Accendere l'oscilloscopio e l'amplificatore e assicurarsi che il tubo ad alta pressione del dispositivo LFPI sia privo di bolle d'aria. Testare il dispositivo erogando circa 10 impulsi fino a quando non emette un segnale costante. Regolare l'angolo della posizione iniziale del pendolo per raggiungere un'intensità dell'impulso di circa 2,0 atm.
- Collegare la cannula della lesione al dispositivo LFPI. Indurre lesioni cerebrali premendo il grilletto e rilasciando il pendolo. Quindi, ottenere un impulso e trasmetterlo alla dura madre attraverso l'intero sistema di tubi chiusi riempiti di fluido.
- Operare i topi del gruppo fittizio con la stessa procedura chirurgica. Non eseguire l'LFPI.