Induzione mediata da Cre-LoxP di malformazioni cavernose cerebrali in un modello murino

Abstract

Fonte: Choi, J. P., et al. Imaging di induzione e micro-CT di malformazioni cavernose cerebrali in modello murino. J. Vis. Exp. (2017)

In questo video, un cucciolo di topo geneticamente modificato che porta il gene Ccm2 affiancato da siti loxP e Cre ricombinasi fusa a un recettore degli estrogeni viene utilizzato per indurre malformazioni cavernose cerebrali (CCM). La somministrazione di 4-idrossitamoxifene attiva Cre nelle cellule endoteliali, portando alla delezione di Ccm2 e alla formazione di CCM nel cervello.

Protocollo

Tutte le procedure che coinvolgono modelli animali sono state esaminate dal comitato istituzionale locale per la cura degli animali e dal comitato di revisione veterinaria JoVE.

1. Induzione di Malformazioni Cavernose Cerebrali o CCM in Modelli Murini

1. Croce Cdh5-CreErt2; Topi Ccm2fl/fl con Ccm2fl/fl per generare cucciolate con Cdh5-CreErt2; Ccm2fl/fl (Ccm2iECKO) controlli cuccioli e cucciolate (Ccm2fl/fl). Gli animali Cdh5-CreErt2 e Ccm2fl/fl sono stati precedentemente descritti19.
2. Sciogliere 4HT in etanolo al 100% e conservare a -80 °C in aliquote da 30 μL di 4-idrossitamoxifene(4HT) (concentrazione: 10 mg/mL). Il giorno dell'uso, diluire aliquotato 4HT in olio di mais (0,5 mg/mL).
3. Iniettare intragastricamente 50 μL di 4HT (0,5 mg/mL) ai cuccioli neonatali a P1 per indurre lesioni sperimentali da CCM utilizzando una siringa da insulina.

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
4-idrossi tamoxifene	Sigma-Aldrich	H6278	Per attivare Cdh5-CreErt2
Olio di mais	Sigma-Aldrich	C8267-500ML	Per diluire il 4-idrossi tamoxifene
Siringa da insulina