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Tutte le procedure che coinvolgono modelli animali sono state esaminate dal comitato istituzionale locale per la cura degli animali e dal comitato di revisione veterinaria JoVE.
1. Chirurgia dell'emisezione toracica
- Indossare dispositivi di protezione adeguati (guanti, maschera e camice) per mantenere un ambiente asettico per l'intervento chirurgico. Pulire l'area chirurgica con salviettine imbevute di alcol e posizionare teli chirurgici sterili sul campo chirurgico. Sterilizzare gli strumenti chirurgici e posizionarli sul campo chirurgico.
- Anestetizzare il ratto con una miscela di gas isoflurano (3% di induzione, 0,5-3% di mantenimento) e ossigeno (1 L/min). Confermare la corretta profondità dell'anestesia chirurgica verificando l'assenza di pizzicamento delle dita dei piedi e risposte riflesse corneali. Monitorare continuamente il ratto durante l'intera procedura e regolare la quantità di erogazione dell'anestetico secondo necessità per mantenere la profondità dell'anestetico chirurgico.
- Radere il tronco dorsale tra l'anca e il collo, posizionare il ratto sul campo chirurgico, disinfettare il sito dell'incisione con salviettine imbevute di alcol e soluzione di proviodio e mantenere la temperatura corporea interna a 37 °C utilizzando un termoforo a feedback controllato monitorato da un termometro rettale.
- Posizionare l'unguento oftalmico sugli occhi per mantenerli idratati e riapplicarlo durante l'intervento chirurgico secondo necessità.
- Praticare un'incisione di 2,5 cm nella pelle sovrapponendo le vertebre T6−T10 con un bisturi. Ritrarre la pelle e il grasso superficiale utilizzando le forbici da dissezione smussate.
nota: I segmenti vertebrali T6−T10 possono essere identificati sia rostralmente mediante una delicata palpazione dei segmenti spinali dorsali dalla base del cranio a partire dalla notevole protuberanza della 2a vertebra toracica sia caudalmente mediante palpazione della costola fluttuante più posteriore, che indurrà il movimento nella 13a vertebra toracica.
- Separare i muscoli paravertebrali inserendosi sulla faccia dorsale delle vertebre T7−T9 utilizzando forbici da dissezione smussate e un divaricatore autobloccante. Sbriglia e rimuove il tessuto rimanente utilizzando una pinza fine e applicatori con punta di cotone per esporre i processi spinosi e le lamine vertebrali><.
nota: Questo e i seguenti passaggi sono notevolmente aiutati dalla visualizzazione microscopica (~5−15x).
- Tagliare con cura le faccette (articolazioni zigapofisarie) bilateralmente sulle vertebre T7 e T8 con delicati trimmer ossei. Tagliare superficialmente il tessuto connettivo dorsale tra le lamine vertebrali T8 e T9 con un bisturi (profondità 1 mm) facendo attenzione a non ferire il midollo sottostante.
- Rimuovere il processo spinoso della vertebra T8 con trimmer ossei. Con una pinza emostatica curva accuratamente bloccata sul processo spinoso T7, ruotare l'estremità caudale delle lamine T8 leggermente rostralmente (~20°), inserire i trimmer ossei sotto la lamina T8 ed eseguire un taglio sulla linea mediana che si estende lungo la lamina. Continuare la laminectomia ripetendo i tagli sul lato sinistro e destro della lamina vertebrale mediale ai processi trasversali per esporre il midollo spinale.
nota: Fare attenzione a rimuovere tutti i frammenti ossei creati dalla laminectomia.
- Gocciolare lidocaina (2%, 0,1 ml) nel canale spinale esposto e rimuovere la dura madre che si sovrappone al segmento spinale T8 utilizzando una pinza fine e forbici per iridectomia. Ripetere la somministrazione di lidocaina al cordone esposto e identificare la linea mediana del cordone mediante la visualizzazione di una linea centrale creata tra i processi spinosi che si estendono tra la vertebra T7-T9 esposta.
nota: Insieme ai processi spinosi su T7 e T9, anche i gangli della radice dorsale esposti su T8 possono essere utilizzati per aiutare nell'identificazione della linea mediana. Un ago da 30 G può essere posizionato nella linea mediana del cordone per facilitare la successiva emisezione.
- Emisectare il midollo spinale dalla linea mediana verso un lato con un coltello da dissezione. Fare attenzione a non tagliare l'arteria spinale anteriore sul lato ventrale (non esercitare una pressione decisa sul corpo vertebrale). Usando le forbici per iridectomia, taglia con cura il tessuto rimanente sul lato lesionato del midollo spinale per assicurarti che il quadrante ventrolaterale sia sezionato in modo appropriato.
- Posizionare una spugna emostatica sterile imbevuta di soluzione salina (~6 x 2 mm) nella cavità esposta sopra il midollo spinale e suturare gli strati muscolari (4-0 polyglactin 910). Quindi, sutura la pelle attorno al sito di incisione.
- Fornire un adeguato analgesico (buprenorfina 0,05 mg/kg per via sottocutanea [s.c.]), antibiotico (enrofloxacina, 10 mg/kg s.c.) e reintegrare i liquidi persi con 5 cc di soluzione di ringer lattato (intraperitoneale [i.p.]) immediatamente dopo l'intervento chirurgico.
- Togliete il ratto dall'anestesia. Posizionare il ratto in un ambiente caldo sotto un termoforo o una lampada (~ 33 °C) fino a quando l'animale non è completamente sveglio.
- Fornire analgesia supplementare ogni giorno nei primi 3 giorni post-chirurgici e monitorare continuamente i segni di dolore, perdita di peso, minzione impropria, infezioni, problemi con la guarigione delle ferite o autofagia.