1. Costruzione del dispositivo HIT
- Fissare la molla alla scheda utilizzando due morsetti e quattro viti (Figura 1A). Centrare i morsetti rispetto alla larghezza della tavola e appoggiarli l'uno contro l'altro con il morsetto esterno a filo con il bordo della tavola. Prima di fissare i morsetti, piegarli con una pinza per adattarli perfettamente alla molla.
NOTA: Vedi Tabella 1 per le descrizioni dei materiali necessari per la costruzione del dispositivo HIT. L'estremità bloccata della molla deve trovarsi a 1/8 di pollice (3,2 mm) dal bordo della tavola e l'estremità libera deve estendersi sulla tavola di 3/4 di pollice (19 mm). Regolare la molla in modo che sia parallela alla lunghezza della tavola.
- Avvolgere una volta l'estremità libera della molla con la striscia adesiva di anelli in velcro. Il bordo esterno del Velcro deve essere a filo con l'estremità della molla. Il velcro è importante perché viene utilizzato per fissare la fiala alla molla creando un raccordo a compressione stretto. Il Velcro consente inoltre di collegare e rimuovere facilmente le fiale, consentendo di lavorare molte fiale in un breve periodo di tempo.
- Posizionare il coperchio del secchiello del ghiaccio capovolto, centrato, ben aderente alla tavola di legno. Orientare la regione rialzata del coperchio del secchiello del ghiaccio in modo che il bordo lungo sia parallelo alla larghezza della tavola. Si noti che la regione rialzata del secchiello del ghiaccio è 1/2 pollice (13 mm) più alta della tavola di legno, in modo che quando una fiala è attaccata alla molla, la molla non si appoggi sulla tavola.
- Far scorrere l'intero dispositivo contro un oggetto fisso come una parete, in modo che il coperchio del secchiello del ghiaccio sia incastrato tra la tavola e l'oggetto e non si muova.
- Fissare il goniometro di carta al fondo di un vassoio di cartone per fiale e posizionarlo sul bordo contro la lunghezza del pannello in modo che il segno di 90° sia allineato con la molla quando viene tirato indietro in una posizione perfettamente verticale.
2. Funzionamento del dispositivo HIT
- Mettere tra 1 e 60 mosche anestetizzate CO2-anestetizzate in una fiala vuota e tappare la fiala con un batuffolo di cotone aderente.
- Confinare le mosche sul fondo di 1 pollice (2,5 cm) della fiala spingendo il batuffolo di cotone nella fiala fino a quando non si trova a 1 pollice (2,5 cm) dal fondo. È utile tracciare una linea sulla fiala in corrispondenza del segno di 1 pollice (2,5 cm). Si noti che confinare le mosche in regioni più grandi o più piccole della fiala può influenzare la gravità dei fenotipi.
- Attendi 5 minuti affinché le mosche recuperino la mobilità dal CO2. Si noti che non è noto se 5 minuti siano sufficienti per rimuovere completamente gli effetti di CO2.
- Inserire l'estremità della molla nella fiacca fino a quando il bordo interno della Velcro non è a filo con la parte superiore della fiala (Figura 1B). Quando la molla è distesa, 1 pollice (2,5 cm) della fiala deve sovrapporsi alla regione rialzata del coperchio del secchio del ghiaccio. Le fiale possono essere riutilizzate molte volte.
- Mentre sei seduto, tieni la fiala nella regione del Velcro usando il pollice e l'indice della mano sinistra. Tenere la tavola ben salda al piano di lavoro usando la mano destra. In alternativa, utilizzare i morsetti a C per tenere la scheda ben salda al piano di lavoro.
- Tirare la molla perfettamente dritta all'angolo desiderato. Rilasciare la molla. Lasciare che la molla si fermi completamente.
- Togliete la fiala dalla molla e lasciate che le mosche si riprendano per ≥5 minuti. Sottoponi le mosche a un altro colpo o trasferisci le mosche in una fiala con cibo per mosche.
NOTA: Una varietà di saggi può essere utilizzata per valutare gli effetti fenotipici dei colpi dal dispositivo HIT. Ad esempio, gli effetti sulla longevità possono essere determinati analizzando la percentuale di mosche che sopravvivono a volte dopo un infortunio, gli effetti sulla morfologia cerebrale possono essere determinati dall'analisi istologica della testa e gli effetti sull'espressione genica possono essere determinati dall'analisi quantitativa dei livelli di mRNA.
- Determinare gli effetti della procedura che non sono dovuti a scioperi trattando in modo identico le mosche di controllo che non sono soggette a scioperi. Indossare protezioni per l'udito perché l'impatto della fiala contro il coperchio del secchiello del ghiaccio produce un forte rumore.
