Modello di invasione tumorale basato su matrice utilizzando la co-coltura del glioblastoma della microglia

Abstract

Fonte: Coniglio, S., et al. Saggi di cocoltura per studiare la stimolazione di macrofagi e microglia dell'invasione del glioblastoma. J. Vis. Exp. (2016)

In questo video, le cellule di glioblastoma e microglia vengono miscelate con una soluzione di matrice polimerica e trasferite in un inserto di camera porosa dove si forma un gel, che incorpora le cellule. Le microglia stimolano la migrazione delle cellule di glioblastoma attraverso l'inserto poroso, imitando l'invasione delle cellule tumorali nel tessuto circostante, le cellule vengono quindi fissate e preparate per ulteriori analisi.

Protocollo

1. Marcatura fluorescente delle cellule

NOTA: Etichettare le linee cellulari di glioblastoma e la microglia con coloranti fluorescenti 9. In alternativa, generare linee cellulari che esprimono costitutivamente proteine fluorescenti come GFP/RFP.

1. Piastra le celle su una piastra a 6 pozzetti in modo tale che siano confluenti al 70-80% il giorno della colorazione. Per la linea cellulare di glioblastoma murino GL261 e la linea cellulare di glioblastoma umano U87, piastra 1 x 10⁶ e 1,5 x 10⁶ cellule, rispettivamente, su una piastra di 6 cm 24 ore prima della colorazione.
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Risultati

Figura 1: Schema di due diversi protocolli per l'analisi dell'invasione di cellule di glioblastoma stimolata da microglia/macrofagi. Il pannello superiore illustra il saggio di invasione della camera a matrice pre-rivestita. Il pannello inferiore illustra il saggio di invasione della matrice 3D.

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Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Camera di invasione Corning BioCoat Matrigel: con matrice BD Matrigel	Corning/Fisher Scientific	Gatto: 354481
Terreni privi di siero di macrofagi (MSFM) (500 ml)	Tecnologie per la vita	12065-074
Colorante CMTPX rosso CellTracker	Tecnologie per la vita/Sonde molecolari	C34552
Colorante CellTracker verde CMFDA	Tecnologie per la vita/Sonde molecolari	C2925
Linea cellulare GL261	Istituto Nazionale del Cancro (NCI)
Linea cellulare THP-1	Collezione di colture per tipi di tessuto americano	ATCC TIB-202
RPMI 1640 Medio (500 ml)	Tecnologie per la vita/Gibco	11875-093
Soluzione di formaldeide	Sigma Aldrich	F1635
Inserti per colture cellulari con membrana in policarbonato Corning Transwell (pori da 8 μM) 48 per confezione.	Corning	CLS3422
Estratto della membrana basale a fattore di crescita ridotto della matrice di coltura 3D Cultrex, PathClear	Trevigen	3445-005-01
Siero fetale di vitello (FBS)	Tecnologie per la vita	Gatto: 10500064
Albumina sierica bovina, frazione V, trattata con shock termico	Fisherscientific	BP1600-100
0.5M EDTA	ThermoFisher Scientifico	15575-020