Test delle scale per la valutazione della funzione motoria in un ratto emiparkinsoniano

Abstract

Fonte: Rattka, M, et al., Un nuovo approccio per valutare l'esito motorio degli effetti della stimolazione cerebrale profonda nel ratto emiparkinsoniano: test della scala e del cilindro. J. Vis. Exp. (2016).

Questo video mostra il test delle scale per valutare la funzione motoria in un ratto emiparkinsoniano con una lesione cerebrale destra. La lesione interrompe la segnalazione della dopamina, compromettendo il controllo della zampa sinistra, il che si traduce in più pellet che rimangono sulle scale sinistre, indicando una disfunzione motoria.

Protocollo

Tutte le procedure che coinvolgono modelli animali sono state esaminate dal comitato istituzionale locale per la cura degli animali e dal comitato di revisione veterinaria JoVE.

1. Test delle scale (Figura 1)

1. Fase di acquisizione
   1. Un giorno prima dell'addestramento, familiarizzare gli animali con i pellet utilizzati nel test delle scale.
      1. Facoltativo: per aumentare la motivazione dell'animale utilizzare una restrizione dietetica (10-15 g di cibo da laboratorio standard per mantenere il peso corporeo al 90% del livello di alimentazione libera). Tuttavia, questo non è obbligatorio per ottenere un effetto positivo dell'allenamento. Questo studio è stato condotto senza restrizioni alimentari.
   2. Preparare una scatola per scale in vetro di plastica trasparente (altezza: 34,5 cm, lunghezza: 35,5 cm, larghezza: 12 cm e scomparto stretto 6 cm) pulendo la scatola con una soluzione di acido acetico allo 0,1%. NOTA: La scatola delle scale è una scatola a due scomparti con una piattaforma rialzata e due scale nello scomparto stretto. I gradini sinistri delle scale nello scomparto stretto possono essere raggiunti solo con la zampa sinistra e i gradini destri solo con la zampa destra.
      NOTA: Le scatole standard per scale sono costituite da due scomparti con coperchio. Se devono essere utilizzati per esperimenti con ratti stimolati via cavo, utilizzare una scatola alta senza coperchio.
   3. Rimuovi la scala e riempi i pozzetti su ogni gradino con otto pellet da 45 mg.
   4. Inserisci la scala e metti altri otto pellet sulla piattaforma rialzata.
   5. Metti il topo nella scatola di trasporto.
   6. Trasporta il ratto dalla gabbia di casa alla scatola delle scale utilizzando la scatola di trasporto.
   7. Posiziona il topo nella scatola delle scale (Figura 2).
   8. Dopo cinque minuti, rimuovere l'animale dalla scatola delle scale e rimetterlo nella gabbia domestica utilizzando la scatola di trasporto.
   9. Nota quanti pellet sono stati mangiati dalla piattaforma e (eventualmente) dalle scale destra e sinistra.
   10. Riempi la scala riempiendo i pozzetti su ogni gradino con otto pellet da 45 mg.
   11. Pulire la scatola delle scale con una soluzione di acido acetico allo 0,1% e posizionare i pellet aggiuntivi sulla piattaforma.
   12. Ripetere questa procedura (fase di acquisizione) per tre giorni di seguito.
       NOTA: Tutti gli esperimenti descritti sono stati eseguiti su ratti maschi Sprague Dawley. La durata dei diversi moduli di formazione può variare nei ratti di diversi ceppi, sessi e venditori.
2. Test di libera scelta
   1. Pulire la scatola delle scale con una soluzione di acido acetico allo 0,1%.
   2. Rimuovi la scala e riempi i pozzetti su ogni gradino con otto pellet da 45 mg.
   3. Metti il topo nella scatola di trasporto.
   4. Trasporta il ratto dalla gabbia di casa alla scatola delle scale utilizzando la scatola di trasporto.
   5. Metti il topo nella scatola delle scale.
   6. Dopo cinque minuti, rimuovere l'animale dalla scatola delle scale e rimetterlo nella gabbia domestica utilizzando la scatola di trasporto.
      Nota quanti pellet sono stati mangiati dalla scala destra e sinistra.
   7. NOTA: Se gli animali hanno ancora problemi con l'afferrare i pallini, aggiungine altri sulla piattaforma dove possono essere facilmente raggiunti.
   8. Riempi la scala riempiendo i pozzetti su ogni gradino con otto pellet da 45 mg.
   9. Pulisci la scatola delle scale con una soluzione di acido acetico allo 0,1% per l'animale successivo.
   10. Ripetere questa procedura (fase a libera scelta) per tre giorni di seguito.
       NOTA: I risultati presentati sono stati ottenuti da un addestramento condotto senza un periodo di riposo tra i moduli. Alcuni gruppi preferiscono un giorno di riposo per il consolidamento, per supportare il processo di formazione.
3. Test di scelta forzata
   1. Pulire la scatola delle scale con una soluzione di acido acetico allo 0,1%.
   2. Rimuovere la scala e riempire i pozzetti su ogni gradino della scala sinistra con otto (primi tre giorni del modulo) o quattro (tre giorni consecutivi del modulo) pellet da 45 mg.
      1. Eseguire il test di scelta forzata sul lato, dove si verificherà la compromissione.
         NOTA: Eseguiamo la lesione del Parkinson sull'emisfero destro e quindi alleniamo selettivamente la zampa sinistra.
   3. Metti il topo nella scatola di trasporto.
   4. Trasporta il ratto dalla gabbia di casa alla scatola delle scale utilizzando la scatola di trasporto.
   5. Metti il topo nella scatola delle scale.
   6. Dopo cinque minuti, rimuovere l'animale dalla scatola delle scale e rimetterlo nella gabbia domestica utilizzando la scatola di trasporto.
   7. Nota quanti pellet sono stati mangiati dalla scala di sinistra.
   8. Riempi la scala riempiendo i pozzetti su ogni gradino con otto o quattro pellet da 45 mg (il numero di pellet dipende dal giorno dell'allenamento).
   9. Pulisci la scatola delle scale con una soluzione di acido acetico allo 0,1% per l'animale successivo.
   10. Ripetere questa procedura (fase di scelta forzata) per sei giorni di seguito.
4. Acquisizione dati
   1. Eseguire l'esperimento come descritto per il modulo di scelta forzata (quattro pellet in ogni pozzetto sulla scala di sinistra) per due giorni consecutivi. Calcola il tasso di successo (numero di pellet mangiati) come media dei due giorni.

Risultati

Figura 1: Configurazione del test delle scale. La scatola della scala sistemata con pellet sulla scala di sinistra. (A) vista laterale, (B) vista dall'alto.

Figura 2: Test delle scale. Un ratto emiparkinsoniano durante il test delle scale.

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Scatola per scale senza coperchio	Glas Keil, Germania		su misura
Pellet di precisione senza polvere, 45 mg	Bio Serv	F0021