Denervazione simpatica delle arterie renali in un modello murino di ipertensione indotta da angiotensina II

Abstract

Fonte: Wang, M., et al., La denervazione renale migliorata ha mitigato l'ipertensione indotta dall'infusione di angiotensina II. J. Vis. Exp. (2022)

Questo video mostra una procedura per la denervazione simpatica dell'arteria renale in un modello murino iperteso indotto da angiotensina II, utilizzando il fenolo per interrompere la funzione del nervo simpatico e ridurre la pressione sanguigna.

Protocollo

Tutte le procedure che coinvolgono modelli animali sono state esaminate dal comitato istituzionale locale per la cura degli animali e dal comitato di revisione veterinaria JoVE.

1. Denervazione renale bilaterale

1. Selezionare i topi con pressione arteriosa elevata (BP) ≥140/90 mmHg o aumento del 25% della pressione arteriosa sistolica/diastolica, 1 settimana dopo l'infusione di Ang II.
2. Registrare il peso dell'animale prima dell'intervento chirurgico e scegliere animali con un peso minimo di 24 g per l'intervento di denervazione renale.
3. Anestetizzare i topi usando pentobarbital di sodio. Confermare la profondità dell'anestesia con un riflesso negativo di pizzicamento delle dita.
4. Rimuovi i peli sull'addome con un rasoio. Eseguire questa procedura con attenzione e accuratezza per evitare qualsiasi contaminazione chirurgica.
5. Posiziona i topi sul tavolo operatorio, tenendo l'addome sollevato, e fissa gli arti con del nastro adesivo. Disinfettare la pelle addominale con iodio povidone, seguito da tre salviette con etanolo al 70%.
6. Praticare un'incisione addominale ventrale di 2 cm sulla linea mediana utilizzando una lama di bisturi. Tirare indietro l'intestino con una garza imbevuta di soluzione fisiologica a 37 °C per esporre l'arteria renale sinistra. Sezionare con attenzione ma senza mezzi termini il grasso dall'arteria renale usando una pinzetta curva. (Figura 1A-C).
7. Tagliare la carta per pesare in un rettangolo della stessa dimensione dell'arteria renale con forbici affilate sterili. Per riferimento, tagliare la carta per pesare della stessa dimensione mostrata dalla linea tratteggiata in Figura 1C.
   NOTA: È una parte fondamentale dell'intervento chirurgico cercare di tagliare diversi pezzi di carta per pesare alla volta per mantenere la stessa forma.
8. Immergere la carta per pesare in una soluzione di fenolo/etanolo al 10% per almeno 30 s. Coprire la superficie dell'arteria renale sinistra e avvolgere il recipiente con la carta per pesare, mantenendolo premuto per 2 minuti (Figura 1D). Utilizzare una garza per proteggere i tessuti circostanti per evitare che la carta per pesare tocchi i reni e l'intestino circostanti.
   NOTA: La soluzione di fenolo è stabile in provette di plastica ma non in fiale di vetro. Pertanto, la soluzione deve essere preparata al momento per ogni esperimento.
9. Eseguire la stessa procedura per l'arteria renale destra. Eseguire l'intervento chirurgico fittizio con carta da pesare immersa in soluzione salina.
10. Riposizionare i muscoli nella posizione iniziale e chiudere il peritoneo con suture Vicryl 6-0 in una sutura interrotta. Quindi, chiudere la pelle con suture di nylon 4-0 interrotte. Monitora tutti i mouse fino a quando non si riprendono completamente.

2. Cure post-operatorie

1. Applicare lo iodio povidone sull'incisione e posizionare l'animale in una coperta elettrica riscaldata per il recupero e il monitoraggio post-operatorio.
2. Monitora i topi due volte al giorno per valutare la presenza di arrossamento, gonfiore e dolore o infezione addominale. Fornire meloxicam (0,5 mg/kg, SC) a tutti i topi circa 1 ora prima e 24 ore dopo la procedura RDN.

Risultati

Figura 1: Procedura di RDN con carta di pesata. (A,B) Immagini anatomiche dell'arteria renale da topi C57BL/6 (ex vivo). (C) La parte all'interno delle due linee tratteggiate si riferisce all'area coperta dalla carta di pesatura. (D) Coprire la superficie dell'arteria renale bilaterale con l'apposita carta per pesare immersa in una soluzion...

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Angiotensina II	Sangon Biotech	CAS:4474-91-3	Per creare un modello di animol ipertensivo
Analisi della pressione sanguigna	Visitech Systems	BP-2000	Misurare la pressione sanguigna dei topi
Mini-pompa osmotica	DURECT Corporation	CA 95014	Da riempire con Angiotensina II
Carta per pesare	Sangon Biotech	F512112	Distruggere il nervo renale con carta per pesare imbevuta di fenolo; https://www.sangon.com/productDetail?productInfo.code=F512112.