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Tutte le procedure che coinvolgono modelli animali sono state esaminate dal comitato istituzionale locale per la cura degli animali e dal comitato di revisione veterinaria JoVE.
1. Istituzione di un modello unilaterale di occlusione/riperfusione dell'arteria cerebrale media (MCAO/R) nei ratti
NOTA: Durante l'operazione, utilizzare delicatamente le micropinze per prevenire la rottura del vaso sanguigno. Evitare danni ai nervi e ad altri vasi sanguigni nel collo del ratto quando il vaso è isolato. Bisogna fare attenzione a presentare una tecnica asettica appropriata per tutte le procedure chirurgiche di sopravvivenza. La tecnica illustrata più avanti nel video deve essere praticata durante l'intera procedura.
- Durante l'intervento, mantenere la temperatura corporea dei ratti a 37,0 ± 0,5 °C in un termostato per piccoli animali. Preparare quattro punti di sutura 5-0 da 6 cm.
- Impostare la portata di ossigeno di una macchina per anestesia per piccoli animali (con un dispositivo di trattamento dei gas di scarico) a 0,4-0,6 L/min e la concentrazione di isoflurano al 5%. Metti il topo nella macchina per anestesia.
- Dopo che l'animale è svenuto, posizionare il ratto su un tavolo di fissaggio chirurgico. Collegare la bocca del ratto alla maschera della macchina per anestesia (la portata di ossigeno rimane invariata; regolare la concentrazione di isoflurano al 3%). Confermare che l'animale sia entrato in anestesia profonda osservando una mancanza di tensione alle estremità, riflessi corneali e dolore.
- Fissare i suoi arti per sdraiarsi sul tavolo operatorio con bende di carta (o altri strumenti).
- Rimuovere il pelo del collo con un rasoio elettrico e sterilizzare con alcool al 75% (lo iodoforo è migliore). Fissa la bocca del topo con un gancio.
- Tagliare 2-3 cm lungo la forma longitudinale centrale del collo con le forbici oftalmiche.
- Separare l'arteria carotide comune. Separare il muscolo sottocutaneo con una pinza oftalmica. Usa un divaricatore fatto in casa per esporre completamente il campo visivo. Dopo aver separato il muscolo anteriore della trachea con una pinza oftalmica, separare lungo il tendine sternocleidomastoideo destro fino a quando l'arteria carotide comune è visibile.
- Isolare l'arteria carotide comune, l'arteria carotide esterna e l'arteria carotide interna con una pinza oftalmica. Legare l'arteria carotide comune (nodo duro), l'arteria carotide esterna lontana dall'estremità del cuore (nodo duro) e l'arteria carotide interna (nodo sciolto) con suture 5-0. Foderare l'arteria carotide esterna vicino all'estremità del cuore con punti di sutura 5-0.
- Inserire un bullone filettato. Tagliare una piccola apertura nell'arteria carotide esterna usando le forbici oftalmiche e inserire delicatamente un bullone filettato. Legare la sutura dell'arteria carotide esterna che è stata in un nodo allentato e tagliare l'arteria carotide esterna.
- Allentare il nodo sciolto dell'arteria carotide interna e continuare a inserire il bullone filettato all'inizio dell'arteria cerebrale media (sutura contrassegnata). Quindi, tagliare il bullone filettato esposto.
- Raggiunto il tempo ischemico (2-3 ore), fissare la frattura dell'arteria carotide esterna con una micropinza ed estrarre delicatamente il bullone filettato con un'altra micropinza. Quando l'estremità anteriore del bullone filettato è completamente ritirata dall'arteria carotide interna, legare l'arteria carotide esterna che era rivestita con suture 5-0 e quindi estrarre completamente il bullone filettato.
- Allentare l'arteria carotide comune e tamponare ~ 50.000 U di polvere di penicillina sodica sulla superficie della ferita per prevenire l'infezione. Sutura dei muscoli sottocutanei e della pelle con 4 suture.
- Somministrare ~0,2 ml di soluzione fisiologica sterile al ratto per via orale utilizzando una siringa da 1 ml (l'iniezione SQ-PEN è migliore) per prevenire la carenza d'acqua postoperatoria dopo aver rimesso il ratto nella gabbia.