Valutazione della contrazione muscolare con il trattamento con bloccanti neuromuscolari

Abstract

Fonte: Lin, C. U., et al., Giunzione neuromuscolare in vitro indotta da cellule staminali pluripotenti indotte umane. J. Vis. Exp. (2020)

Questo video mostra la valutazione del muscolo utilizzando motoneuroni in coltura, cellule di Schwann e miotubi, seguita dal trattamento con un bloccante neuromuscolare per inibire la contrazione. I grafici time-motion codificati a colori mostrano un time-motion graphic codificato a colori. Il rosso indica il movimento più veloce e il blu indica il più lento.

Protocollo

1. Trattamento della contrazione muscolare e del curaro

1. Per innescare la contrazione del miotubo, aggiungere 25 mM di cloruro di calcio (CaCl₂) al terreno di coltura. Il movimento dei miotubi può essere osservato in 1\u20122 min.
2. Posizionare la piastra a 6 pozzetti sul tavolino di un microscopio invertito. Registra un filmato della contrazione del miotubo mediante microscopia su cellule vive.
3. Per fermare la contrazione del miotubo, aggiungere il curaro al terreno di coltura (300 ng/mL). Quindi, registra il filmato come passaggio 1.2.
4. Apri il file del filmato con il software di analisi vettoriale del movimento, quindi fai clic sul pulsante Analisi del movimento per analizzare il filmato.
   NOTA: La contrazione dei miotubi è mostrata come grafico time-motion. I filmati sono codificati a colori per mostrare la velocità di movimento dei miotubi. I segnali scintillanti codificati a colori indicano i movimenti dei miotubi, dove il colore rosso mostra la velocità di movimento più elevata e il colore blu mostra la velocità di movimento più lenta.

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Terreno, fattori di crescita e reagenti	Articolo	Marchio	Gatto. Numero
	B27, Gibco	Gibco	12587-001
	BDNF	Sistemi di ricerca e sviluppo	248-BD
	ECM, Matrigel (fattore di crescita ridotto)	Corning	356230
	GDNF	Sistemi di ricerca e sviluppo	212-GD
	Rivestimento ionico	JEOL	JEC3000FC
	Microscopia su cellule vive	Nikon	Microscopio Eclipse Ti
	Software di analisi dei vettori di movimento	Sony	SI8000
	N2, Gibco	Gibco	17502-048
	Terreno neurobasale	Gibco	21103-049
	NT3	Sistemi di ricerca e sviluppo	267-N3