Induzione di ictus trombotico attraverso ipossia e ischemia in un modello murino

Abstract

Fonte: Sun, Y. Y., et al., Un modello di ictus trombotico basato sull'ipossia-ischemia cerebrale transitoria. J. Vis. Exp. (2015).'

Questo video mostra la procedura di replicazione di un ictus trombotico in un modello murino bloccando l'arteria carotide comune destra ed esponendo il topo a un ambiente a basso contenuto di ossigeno. Questo processo riduce il flusso di sangue e ossigeno al cervello, causando la formazione di coaguli di sangue e danni cerebrali.

Protocollo

Tutte le procedure che coinvolgono modelli animali sono state esaminate dal comitato istituzionale locale per la cura degli animali e dal comitato di revisione veterinaria JoVE.

1. Configurazione

1. Preparare il letto chirurgico su un termoforo collegato a una pompa di calore a 37 °C per almeno 15 minuti prima dell'intervento. Posizionare un paranuca utilizzando il fusto di una siringa da 3 ml sul letto chirurgico. Preparare il gas per anestesia con isoflurano al 2% in aria medica.
2. Prepara pinze autoclavate, forbici, micro portaaghi, un emostato, tamponi di cotone e punti di sutura. Inoltre, prepara la colla per fazzoletti e l'unguento per gli occhi.
3. Configurare il sistema di ipossia e i regolatori di temperatura con una lampada riscaldante e una sonda rettale. Preparare gas di ipossia con isoflurano al 2% in O₂ bilanciato da 92,5% di N₂.
4. Un'ora prima dell'intervento chirurgico, i topi vengono analgesizzati mediante iniezione sottocutanea di un Meloxicam a lento rilascio (4,0 mg/kg).

2. Ipossia-ischemia cerebrale transitoria (Figura 1B)

1. Anestetizzare topi maschi C57BL/6 di 10-13 settimane del peso compreso tra 22 e 30 g nella camera di induzione dell'anestesia con isoflurano al 3% fino a quando l'animale non risponde alla pressione del piede, quindi rimuovere i peli sul collo destro utilizzando un rasoio elettronico.
2. Posizionare i topi sul letto chirurgico collegati con isoflurano al 2% nell'aria medica a una portata di 2 L/min. Fissare gli arti anteriori distesi lungo il rotolo del collo ai lati utilizzando del nastro adesivo.
3. Pulire il sito chirurgico per l'incisione con betadina seguita da alcol e poi tamponi di cotone.
4. Sotto un microscopio da dissezione, praticare un'incisione cervicale destra di 0,5 cm utilizzando una pinza diritta e micro forbici a circa 0,2 cm lateralmente dalla pelle della linea mediana.
5. Usa un paio di pinze finemente seghettate per separare la fascia e il tessuto per esporre l'arteria carotide comune destra (RCCA). Separare con cura l'RCCA dal nervo vagale utilizzando un paio di pinze lisce e sottili.
6. Annodare dal vivo due suture di seta 5-0 pretagliate (sganciabili) sull'RCCA, quindi cucire la pelle utilizzando suture monofilamento di nylon 4-0 (Figura 1C).
7. Applicare un unguento per gli occhi su entrambi gli occhi per prevenire la secchezza.
8. Trasferire rapidamente i topi nel sistema di ipossia e mettere il naso e la bocca in una maschera facciale con isoflurano al 2% in O₂ al 7,5% a una velocità di flusso di 0,5-1 L/min per 30 minuti.
   1. Durante l'ipossia, utilizzare regolatori di temperatura con lampade riscaldanti per controllare la temperatura rettale a 37,5 ± 0,5 °C. Monitorare la frequenza respiratoria a 80-120 respiri/min. Mantenere la temperatura corporea al di sopra dei 37 °C durante l'ipossia è importante per creare un infarto cerebrale costante. La bassa frequenza respiratoria di solito si verifica dopo 20 minuti di ipossia. Rimuovere la maschera facciale e consentire la normale alimentazione d'aria se la frequenza respiratoria scende al di sotto di 40. Questo richiede 1-2 minuti e non conta per la durata dell'ipossia di 30 minuti

Risultati

Figura 1: Procedura di insulto transitorio di ipossia-ischemia cerebrale (tHI) in topi adulti. (A) La triade di Virchow che spinge la trombosi include la stasi del flusso sanguigno, la lesione endoteliale e l'ipercoagulabilità del sangue. (B) Un diagramma schematico della procedura di ictus tHI. Due nodi rilasciabili sono stati legati all'arteria carotide comune destra (CCA) e seguiti dall'erogazione...

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Topi maschi adulti	Fiume Charles	C57BL/6	10~13 settimane (22~30 g)
sistema mobile di anestesia animale da laboratorio	VetEquip	901807	Anestesia
Serbatoio d'aria medicale (compressa)	Airgas	UN1002	Anestesia
Isoflurano	Piramal Sanità	NDC 66794-013-25	Anestesia
Sistema di anestesia animale da laboratorio multistazione	Chirurgivet	V703501	Sistema di ipossia
7,5% O2 bilanciato dal 92,5% serbatoio N2	Airgas	UN1956	Sistema di ipossia
Regolatore di temperatura con lampada riscaldante	Cole Parmer	EW-89000-10	Regolatori di temperatura
Sonda rettale	Cole Parmer	NCI-00141PG	Regolatori di temperatura
Microscopio da dissezione	Olimpo	SZ40	Impostazione chirurgica
Pompa di calore con termoparrucchino	Gaymar	TP700	Impostazione chirurgica
Pinza curva fine (seghettata)	FST	11370-31	Strumento chirurgico
Pinza curva fine (liscia)	FST	11373-12	Strumento chirurgico
micro forbici	FST	15000-03	Strumento chirurgico
Micro porta aghi	FST	12060-01	Strumento chirurgico
Emostatici di Halsted-Mosquito	FST	13008-12	Strumento chirurgico
5-0 sutura di seta	Apparato di Harvard	624143	Forniture chirurgiche
4-0 Sutura monofilamento di nylon	GUARDA	766B	Forniture chirurgiche
Colla per tessuti	Laboratori Abbott	NC9855218	Forniture chirurgiche
Unguento Puralube Vet	Pescatore	NC0138063	Prevenzione della secchezza oculare