Articolo metodologico

Tecnica per indurre convulsioni post-traumatiche in un modello murino tramite una lesione traumatica da perdita di peso

8 luglio 2025

In questo articolo

Abstract

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Fonte: Shandra, O. et al., Induzione di epilessia post-traumatica in un modello murino di lesione cerebrale traumatica diffusa ripetitiva. J. Vis. Exp. (2020)

Protocollo

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Tutte le procedure che coinvolgono modelli animali sono state esaminate dal comitato istituzionale locale per la cura degli animali e dal comitato di revisione veterinaria JoVE.

1. Procedura di caduta del peso

  1. Posiziona il mouse in una camera di induzione. Impostare il flusso di ossigeno e il vuoto a 1 L/min e il livello di gas isoflurano al 3%-5%. Anestetizzare il topo per 5 minuti.
  2. Rimuovere il mouse dalla camera di induzione e posizionarlo su un cuscinetto di gommapiuma. Verificare l'assenza di risposta a un pizzicamento di un dito del piede o della coda.
  3. Somministrare un analgesico (0,1 mg/kg di buprenorfina) per via sottocutanea. Se l'intervento di elettroencefalografia (EEG) viene eseguito lo stesso giorno, somministrare la buprenorfina per via sottocutanea in combinazione con l'antinfiammatorio non steroideo carprofene (5 mg/kg).
  4. Somministrare la soluzione di lattato di sodio (3 μl per grammo di peso dell'animale) per via sottocutanea prima o dopo l'ultimo impatto. La soluzione di lattato di sodio può essere miscelata con gli analgesici per una somministrazione rapida in un'unica iniezione.
    NOTA: La soluzione di lattato di sodio contiene una miscela di cloruro di sodio, cloruro di potassio, cloruro di calcio e lattato di sodio in acqua. Questo passaggio aiuta a sostituire liquidi ed elettroliti, favorendo il recupero.
  5. Posizionare la testa del mouse sotto il tubo di caduta del peso (Figura 1A) e posizionare un disco piatto in acciaio inossidabile (1,3 cm di diametro, 1 mm di spessore e 880 mg di peso) al centro della testa, tra la linea degli occhi e delle orecchie.
    NOTA: Questo disco diffonde l'impatto attraverso la superficie del cranio (Figura 1B).
  6. Rimuovere il perno nel tubo di caduta pesi per rilasciare l'asta pesi da 100 g da un'altezza di 50 cm. Per indurre la finta lesione per i topi di controllo, rimuovere l'asta del peso dal tubo per evitare il rilascio accidentale del perno e la caduta del peso.
    NOTA: La testa dell'animale deve essere posizionata in piano, in modo che l'asta cada liberamente su tutta la superficie del disco.
  7. Posiziona l'animale incosciente sulla schiena per il recupero su un termoforo coperto con un asciugamano assorbente polifoderato sterile. Il tempo di recupero del riflesso raddrizzante (cioè il tempo impiegato dal mouse per raddrizzarsi dalla schiena) può essere misurato come lettura del tempo trascorso in stato di incoscienza.

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Risultati

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Figura 1: Il modello murino di lesione cerebrale traumatica diffusa ripetitiva (TBI). (A) Dispositivo di caduta del peso. (a1) Tubo di caduta pesi. (a2) Una canna da 100 g. (a3) Perno che tiene l'asta. (a4) Corda per sollevare l'asta se si modifica l'altezza o si rimuove l'asta dal tubo di caduta del peso. (...

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Dichiarazioni

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
Nessun conflitto di interessi dichiarato.

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo
NomeAziendaNumero di catalogoCommenti
BuprenorfinaPar Pharmaceuticals, Cos. Inc., Spring Valley, NY, Stati Uniti60969
C57BL/6 topiHarlan/Envigo Laboratories Inc maschio, 12-16 settimane
C57BL/6 topiIl laboratorio Jackson maschio, 12-16 settimane
CarprofeneZoetis Services LLC, Parsippany, NJ, Stati Uniti 26357NOTA: questo farmaco viene aggiunto durante la perdita di peso solo se l'impianto di elettrodi stereotassici verrà eseguito lo stesso giorno
Liquido Fluriso per anestesia per inalazioneFornitore verificato - MWI Veterinary Supply Co., Stati Uniti502017
Disco in acciaio inossidabileSu misura
Tamponi assorbenti sterili polifoderatiCardinal Health, Stati Uniti3520

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