Generazione di un modello di coltura d'organo per simulare la malattia del disco intervertebrale in stadio iniziale

Abstract

Fonte: Saravi, B. et al., Un modello di coltura d'organo proinfiammatorio e degenerativo per simulare la malattia del disco intervertebrale in fase iniziale. J. Vis. Exp. (2021).

Questo video dimostra lo sviluppo di un modello di coltura d'organo pro-infiammatorio e degenerativo per la malattia del disco intervertebrale (IVD) in stadio iniziale utilizzando il TNF-α. Delinea la procedura per iniettare il TNF-α nel disco intervertebrale e spiega i meccanismi attraverso i quali il TNF-α induce l'infiammazione e la degradazione dell'IVD.

Protocollo

Tutte le procedure che coinvolgono campioni di animali sono state esaminate e approvate dal comitato di revisione etica degli animali appropriato.

1. Coltura e carico del disco intervertebrale (IVD)

1. Trasferire i dischi intervertebrali (IVD) nelle camere IVD e aggiungere il terreno di coltura IVD (Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM, 4,5 g/L di DMEM ad alto contenuto di glucosio per il gruppo fisiologico e 2 g/L di DMEM a basso contenuto di glucosio per il gruppo patologico) + 1% di penicillina/streptomicina + 2% di siero fetale di vitello + 1% di ITS (contiene 5 μg/mL di insulina, 6 μg/mL di transferrina e ....

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Ascorbato-2-fosfato	Sigma-Aldrich, St. Louis, Stati Uniti	A8960
TNF-alfa, proteina umana ricombinante	Sistemi di ricerca e sviluppo, Minnesota, Stati Uniti	210-TA-005
ELISA Bovino IL-8 fai-da-te	Kingfisher Biotech, St. Paul, Stati Uniti	DIY1028B-003
Premix ITS Corning	Corning Inc., New York, Stati Uniti	354350
DMEM alto glucosio	Gibco by life technologies, Carlsbad, Stati Uniti	10741574
DMEM a basso contenuto di glucosio	Gibco by life technologies, Carlsbad, Stati Uniti	11564446
Etanolo per la biologia molecolare	Sigma-Aldrich, St. Louis, Stati Uniti	09-0851
Siero fetale bovino (FBS)	Gibco by life technologies, Carlsbad, Stati Uniti	A4766801
Soluzione di aminoacidi non essenziali	Gibco by life technologies, Carlsbad, Stati Uniti	11140050
Penicillina/Streptomicina(P/S)	gibco di life technologies, Carlsbad, Stati Uniti	11548876
Soluzione tampone fosfato, compressa	Sigma-Aldrich, St. Louis, Stati Uniti	P4417
Primocin	InvivoGen, Sandiego, Stati Uniti	ant-pm-05