Questo video mostra la visualizzazione del traffico proteico di membrana nelle cellule fotorecettrici di Drosophila utilizzando proteine TRPL marcate con eGFP. Descrive in dettaglio la preparazione di mosche transgeniche per l'imaging, l'acquisizione di immagini a fluorescenza di cellule fotorecettrici e la quantificazione del traffico di TRPL misurando la fluorescenza relativa di eGFP nei rabdomeri.
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Articolo metodologico
Studio del traffico proteico di membrana nelle cellule fotorecettrici di Drosophila
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⸱
28 aprile 2025
In questo articolo
Abstract
Protocollo
1. Considerazioni generali
- Usa le scorte di Drosophila che esprimono una traslocazione permanentemente localizzata rabdomeralmente per analisi riguardanti il traffico proteico (ad esempio, canale ionico TRPL (Transient Receptor Potential-like):: enhanced green fluorescent protein (eGFP), Arrestina 2 ( Arr2)::eGFP).
- Predetermina le condizioni di esposizione alla luce delle mosche selezionate per l'approccio sperimentale.
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Risultati
Figura 1: Area di lavoro per microscopia ad immersione in acqua. I materiali necessari sono: (A) provetta da centrifuga da 15 ml, (B) scaglie di ghiaccio, (C) acqua distillata refrigerata, .......
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| 15 mL provetta da centrifuga | Greiner Bio-One | 188271 | |
| Carbon dioxide anestesia fly pad | Flystuff | 59-172 | |
| Lampada a luce fredda (KL 1500 LCD) | Zeiss | ||
| Fiji/ImageJ | NIH | ||
| Microscopio a fluorescenza con lampada UV, fotocamera, set di filtri e software (AxioImager.Z1m, Axiocam 530 mono, 38 HE, ZEN2 blue edition) | Zeiss | ||
| Fluorescent tube | Osram | 4050300518039.00< | |
| Pipetta da laboratorio (20-200 μL) | Eppendorf | ||
| Oggetto slide | Roth | 656.1 | |
| Puntali per pipette (200 μL) | Labsolute | 7695844 | |
| Plastilina (Blu-Tack) | Bostik | 30811745 | |
| Stereomicroscopio (SMZ445) | bordo-superiore:nessuno;'> | ||
| Stereomicroscopio con lampada UV, fotocamera, set di filer e software (MZ16F, MC170 HD, GFP3, LAS 4.12) | Leica |
