Questo video mostra una procedura per generare un modello di trasposizione del neuroma tibiale (TNT) di ratto. Dopo aver esposto il nervo tibiale nella zampa posteriore di un ratto anestetizzato, sezionare il nervo. Quindi, crea un tunnel sottocutaneo, infila il nervo reciso attraverso il tunnel e suturalo in posizione. In assenza di un bersaglio per la reinnervazione, le escrescenze assonali disorganizzate dal nervo reciso formano un neuroma, che innesca il dolore neuropatico eccitando i nocicettori.
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Articolo metodologico
Generazione di un modello di ratto di trasposizione del neuroma tibiale
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28 aprile 2025
In questo articolo
Abstract
Protocollo
Tutte le procedure che coinvolgono modelli animali sono state esaminate dal comitato istituzionale locale per la cura degli animali e dal comitato di revisione veterinaria JoVE.
1. Anestesia e preparazione
NOTA: Questo studio è stato condotto su 15 ratti maschi Sprague Dawley di 12 settimane.
- Anestetizzare gli animali per induzione con isoflurano al 5% e mantenere l'anestesia con isoflurano al 2%-3%.
NOTA: Il mantenimento con isoflurano al 2% di solito si traduce in un'anestesia sufficiente e in una respirazione spontanea, senza la necessità di intubazione tracheale o ventilazione meccanica. - Controlla i riflessi degli animali pizzicando il piede con una pinzetta. Assicurati che l'animale non risponda prima di procedere. Radere il campo operatorio dal ginocchio alla caviglia con un rasoio elettrico e applicare un unguento oftalmico sugli occhi per prevenire la secchezza. Iniettare 0,5 mg/kg di analgesico carprofene per via sottocutanea nella regione addominale.
- Posizionare il ratto anestetizzato sulla schiena con la testa a sinistra o a destra e la gamba da operare vicino al chirurgo. Esoruota l'arto posteriore inferiore in modo che il malleolo mediale sia rivolto verso l'alto. Posizionare il ratto sotto un microscopio stereochirurgico con ingrandimento 6x.
- Disinfettare l'area rasata con tre cicli alternati di scrub a base di iodio seguiti da alcol. Posizionare un foglio sterile con un foro operativo sulla gamba, in modo che sia visibile solo il campo operatorio. Assicurarsi di mantenere queste condizioni sterili durante l'intervento chirurgico.
2. Chirurgia
- Posizionare un piccolo batuffolo di cotone sotto la caviglia per mantenere il campo operatorio orizzontale. Localizzare il ginocchio e praticare delicatamente un'incisione longitudinale di 1-2 cm utilizzando un bisturi sul lato mediale della zampa posteriore da metà polpaccio alla caviglia. Se necessario, aprire ulteriormente la pelle e il sottocute con le micro forbici fino a quando gli strati muscolari non sono visibili.
- Identificare il fascio neurovascolare superficiale come due o tre linee bianche e una più spessa viola/rossa, a volte con rami minori, che possono muoversi liberamente sugli strati muscolari. Utilizzando un elettrocauterizzazione (vedi Tabella dei materiali), coagulare qualsiasi sanguinamento o trasudamento attivo nel campo operatorio. Fare attenzione a non danneggiare il fascio neurovascolare.
- Sezionare senza mezzi termini per aprire la fascia tra i muscoli gastrocnemio, appena dietro al fascio neurovascolare superficiale di 2.2. Tra la fascia dei muscoli si trova il nervo tibiale. Il nervo tibiale è circa tre volte più grande del nervo superficiale nel fascio neurovascolare. Usa l'osso tibiale come punto di riferimento aggiuntivo (il nervo tibiale si trova appena dietro l'osso tibiale).
- Identificare il nervo tibiale e la sua biforcazione.
NOTA: La biforcazione è solitamente visibile con una linea più chiara longitudinalmente sopra il nervo. - Sezionare con cura il nervo tibiale libero dai fasci vascolari circostanti. Eseguire la dissezione muovendo senza mezzi termini il nervo tibiale e tagliando il tessuto esposto che mostra un certo allungamento mentre si muove il nervo tibiale.
NOTA: Se il nervo tibiale è attaccato alle vene che si incrociano dopo la dissezione, queste vene possono essere coagulate per esporre l'intero nervo tibiale. Fare attenzione a non coagulare il fascio tibiale stesso. - Esporre il nervo tibiale prossimalmente fino a quando non scompare sotto uno strato muscolare incrociato. A questo punto, il nervo tibiale sembra immergersi più profondamente nella zampa posteriore verso il ginocchio. Esporre il nervo tibiale distalmente fino alla caviglia.
NOTA: Quando il nervo tibiale è esposto più distale, la quantità di fibre di collagene incrociate (cioè fibre perpendicolari alla direzione delle fibre nervose) aumenterà. Queste fibre di collagene devono essere tagliate per consentire una lunghezza sufficiente per la trasposizione del nervo tibiale.- Quando l'intero nervo tibiale è esposto, riposizionare gli strati muscolari per evitare la disidratazione del nervo. Se il nervo si disidrata (cioè diventa più rigido, opaco e rugoso) e la copertura con strati muscolari non è sufficiente, aggiungi gocce di soluzione salina per idratarlo.
- Utilizzando uno strumento di microchirurgia smussato, preferibilmente un porta microago, sezionare la pelle pretibiale dallo strato muscolare sottocutaneo per creare un tunnel sottocutaneo. Per fare ciò, tieni la pelle sollevata e spingi la punta smussata nel tessuto, parallelamente alla pelle. Assicurarsi che la fine del tunnel si trovi pretibialmente o più lateralmente per garantire una facile accessibilità dell'area per il test del neuroma.
- Aumentare l'isoflurano al 5%. Tornare al nervo tibiale ed esporlo (cioè, tornare al punto descritto nel passaggio 2.6). Taglia il nervo tibiale (cioè entrambi i rami plantari) al livello più distale vicino alla caviglia. Diminuire l'isoflurano al livello normale del 2%-3%.
- Modificare l'ingrandimento del microscopio a 10x o 16x. Identificare l'epinevrio del nervo tibiale prossimale al taglio effettuato al passaggio 2.8 o, in caso di biforcazione più prossimale del nervo tibiale, identificare l'epinevrio di entrambi i rami plantari mediali e laterali prossimali al taglio del passaggio 2.8.
NOTA: L'epinevrio è più bianco e più solido rispetto alle fibre nervose all'interno, che sono più gialle e morbide. - Posiziona con cura un 8-0 sutura di nylon (vedi Tabella dei materiali) attraverso l'epinevrio dell'estremità del nervo prossimale tenendo attentamente l'epinevrio con una pinzetta e inserendo l'ago tra il nervo e l'epinevrio con un morso di circa 0,5 mm. Tirare la sutura e mordere con l'ago per via sottocutanea alla fine del tunnel sottocutaneo realizzato al punto 2.7. Fai un nodo, che trasporrà il nervo lateralmente nel tunnel sottocutaneo.
NOTA: Se entrambi i rami plantari condividono un epineurio comune, una sutura dovrebbe essere sufficiente. Se entrambi i rami plantari hanno il proprio epinevrio, ogni epineurio dovrebbe essere fissato individualmente. Evitare di posizionare la sutura attraverso la pelle; fissarlo solo per via sottocutanea. - Posizionare una sutura più spessa con un colore scuro (preferibilmente una sutura blu o nera 4-0) a filo con l'estremità del nervo fissato, senza penetrare nella pelle. Assicurati che la sutura sia visibile dall'esterno della pelle. Controlla se il nervo rimane in posizione dopo aver mosso la zampa e i muscoli. Tagliare le estremità della sutura con un'estremità della sutura leggermente più lunga sul 4-0 rispetto all'8-0 sutura.
- Riportare l'ingrandimento del microscopio a 6x. Chiudere la pelle con suture intraepidermiche utilizzando l'8-0 suturare e pulire delicatamente la pelle con NaCl allo 0,9% utilizzando un batuffolo di cotone.
3. Trattamento post-chirurgico
- Metti il ratto in una gabbia pulita sotto un tovagliolo di carta in una posizione comoda. Se la stanza è fredda, posiziona un termoforo sotto una parte della gabbia (solo sotto una parte della gabbia poiché l'animale dovrebbe essere in grado di sfuggire al calore quando necessario). Garantire un facile accesso a cibo e acqua.
- Non lasciare il ratto post-chirurgico incustodito fino a quando non ha riacquistato sufficiente coscienza per mantenere la decubito sternale. Il ratto può essere restituito alla compagnia di altri animali quando si è completamente ripreso dall'anestesia dopo l'intervento chirurgico. Questo di solito avviene dopo 1 ora e quando il ratto mostra il suo normale modello di camminata e comportamento.
- A 24 ore e 48 ore dopo l'intervento, somministrare una dose di 0,5 mg/kg di carprofene per via sottocutanea (regione addominale) per trattare il dolore post-operatorio.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Carprofen | Local Veterinary Pharmacy | n/a | La farmacia veterinaria locale produce la diluizione del caprofene |
| Cotton swabs | Nobamed | 974255 | |
| Elettrocauterizzazione | Fine Science Tools | 18010-00 | |
| Ethanol 70% | Interchema BV | 400406 | |
| Ethilon 4.0 | Johnson & Johnson | 1854G | IMPORTANT: il colore dovrebbe essere blu o nero |
| Ethilon 8.0 | Johnson & Johnson | BV130-5 | |
| Isoflo, isoflurane Zoetis | Dechra Veterinary Products | B506 | |
| Gabbie inferiori in rete | StoeltingCo | 57816 and 57824 | |
| Micro pinze< | 11251-35 | < | |
| Strumenti di Fine Science | 12076-12 | ||
| Micro forbici | Fine-Top Style:none;'Fine Science Tools | 15019-10 | |
| Micro pinzette | stile-bordo-superiore:nessuno;'Fine Science Tools | 11254-20< | |
| NaCl 0.9% | Trademed | H7 1000-FRE | |
| Porta aghi | Fine Science Tools | 12004-16 | |
| Unguento oftalmico | Local Veterinary Farmacia | n/a | La farmacia veterinaria locale produce l'unguento |
| Scalpel | Fine Science Tools | 10003-12 | |
| Forbici | Fine Science Tools | 14001-12 | |
| Stereomicroscopio operatorio | Leica | A60 F | |
| Foglio sterile con foro | Evercare OneMed | 1555-01 | |
| Lama chirurgica nr.15 | Fine Science Tools | 10015-00 | |
| Tweezers | Strumenti di Fine Science | 11617-12 |
