Misurazione della risposta uditiva del tronco encefalico nei topi

Abstract

Fonte: Lee, D., et. al. Condizioni sperimentali modificate per la perdita dell'udito indotta dal rumore nei topi e valutazione della funzione uditiva e del danno alle cellule ciliate esterne. J. Vis. Exp. (2023)

Questo video mostra la misurazione della risposta uditiva del tronco encefalico (ABR) in un topo. Gli elettrodi sono posizionati sulla testa, dietro l'orecchio e vicino alla coda di un topo anestetizzato. Vengono erogati stimoli acustici a varie intensità e i segnali elettrici generati vengono registrati come forme d'onda.

Protocollo

Tutte le procedure che coinvolgono modelli animali sono state esaminate dal comitato istituzionale locale per la cura degli animali e dal comitato di revisione veterinaria JoVE.

1. Valutazione della soglia uditiva basata sulla risposta uditiva del tronco encefalico (ABR)

1. Utilizzare un sistema di test ABR commerciale specificamente progettato per piccoli animali.
2. Iniettare intraperitonealmente una miscela di tiletamina e zolazepam (40 mg/kg) e xilazina (9,3 mg/kg) nei topi per l'anestesia generale.
   NOTA: La valutazione ABR richiede ~2 ore. Assicurati di fornire supporto termico tramite un termoforo e applica un unguento per gli occhi per prevenire la secchezza mentre il mouse è sotto anestesia.
3. Misurare l'ABR nel topo in anestesia generale. Posizionare gli elettrodi ad ago sottocutanei (12 mm) sul vertice, dietro il padiglione auricolare dell'orecchio sinistro e indietro vicino alla coda per misurare la soglia uditiva.
4. Presentare gli stimoli acustici utilizzando un altoparlante posto a 1 cm dall'orecchio sinistro dell'animale.
5. Utilizzare un oscilloscopio per controllare gli stimoli acustici. Scegli Onda sinusoidale per gli stimoli e 10 k per la scala della finestra. Ruotare la manopola Frequency per ottenere la frequenza desiderata degli stimoli acustici.
6. Regola l'intensità dello stimolo ruotando la manopola amplitude o AMLP sul generatore di funzioni. Ottenere l'intensità dello stimolo desiderata ruotando la manopola AMLP su una tensione adeguata, calcolata dalla calibrazione.
7. Raccogli le misurazioni ABR in una serie di intensità di stimolo, da 10 dB di livello di pressione sonora SPL a 100 dB SPL, con un passo di 10 dB.
   NOTA: Misura la soglia uditiva in una scatola insonorizzata. Si è assunto che il livello minimo di intensità dello stimolo che potrebbe dare origine a un'onda V distinguibile nel segnale raccolto sia la soglia ABR (Figura 1). Dopo la valutazione ABR, monitorare l'animale fino a quando non si riprende dall'anestesia (~1 h).

Risultati

Figura 1: Misurazione ABR dell'udito. Risultati ABR rappresentativi a 12 kHz, raccolti il 13° giorno (1 settimana dopo l'esposizione al rumore). L'onda V ad ogni intensità è etichettata se distinguibile.

Materiali