Saggio di fagocitosi su cellule vive di cellule simili alla microglia utilizzando sinaptosomi umani

Abstract

Fonte: Funes, S., et. al., Cellule simili alla microglia umana: differenziazione da cellule staminali pluripotenti indotte e saggio di fagocitosi su cellule vive in vitro utilizzando sinaptosomi umani. J. Vis. Exp. (2022)

Questo video mostra un test per studiare la capacità fagocitaria di cellule simili alla microglia utilizzando sinaptosomi marcati con coloranti fluorescenti sensibili al pH.

Protocollo

Saggio di fagocitosi su cellule vive

Plate 20-30 × 10 4 PMP in piastre da 96 pozzetti in 100 μL di terreno completo iMG e segui il processo di differenziazione per 10 giorni.
3. Il giorno del test, prepara la soluzione di colorazione nucleare aggiungendo 1 goccia di un colorante nucleare per cellule vive in 2 mL di terreno basale iMG.

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Materiali per colture cellulari
Primaria 96-well Clear Flat Bottom Microplate	Corning	353872
CellAdhere Laminin-521	STEMCELL Tecnologia	77004	Riferito alla lamina 521
Componenti del supporto di base iMG
Advanced DMEM/F12	Gibco	12634010<
GlutaMAX	Gibco	35050061	Concentrazione finale 1x
N2 supplement, 100x	Gibco	17502-048	Concentrazione finale 1x
Penicillina-Streptomicina (10,000 U/mL)	Gibco	15140122	Concentrazione finale 100 U/mL
Componenti di iMG complete media
55 mM 2-mercaptoethanol	Gibco	21985023	Concentrazione finale 55 μM
IL-34	PeproTech o Biologend	200-34 o 577904	Concentrazione finale 100 ng/mL
iMG base media		<
M-CSF	PeproTech	300-25	Concentrazione finale 5 ng/mL
TGF-β	PeproTech	100-21	Concentrazione finale 50 ng/mL
Saggio di fagocitosi coloranti
NucBlue Live Ready reagent<	R37605	<
ThermoFisher Scientific	P36600	Riferito come colorante
Altri reagenti per colture cellulari
Cytochalasin D	Sigma		Concentrazione finale 10 μM
Software and Equipment
Centrifuga	Eppendorf	Modello 5810R
Cytation 5 lettore di imaging di cellule vive	Biotek		<
Biotek	version 3.03

td style='imbottitura:0px 3px;allineamento verticale:fondo;'>Concentrazione finale 1xtd style='padding:0px 3px;vertical-align:bottom;'>Concentrazione finale 1xtd style='imbottitura:0px 3px;allineamento-verticale:fondo;'>Invitrogentd style='imbottitura:0px 3px;allineamento-verticale:fondo;'>pHrodo Rosso, estere succinimidilico sensibile al pHtd style='padding:0px 3px;vertical-align:bottom;'>Gen5 Microplate Reader and Imager Software