Esecuzione dell'assotomia Crush sul nervo facciale in un modello murino

Abstract

Fonte: Olmstead, D. N., et al., Assotomia del nervo facciale nei topi: un modello per studiare la risposta dei motoneuroni alle lesioni. J. Vis. Exp. (2015).

Questo video mostra la procedura di schiacciamento del nervo facciale in un topo, in cui la dissezione smussata attraverso punti di riferimento chiave espone il tronco del nervo facciale al forame stilomastoideo. Le pinze vengono quindi utilizzate per comprimere il tronco nervoso, inducendo danni assonali e interrompendo la trasmissione del segnale neuronale.

Protocollo

Tutte le procedure che coinvolgono modelli animali sono state esaminate dal comitato istituzionale locale per la cura degli animali e dal comitato di revisione veterinaria JoVE.

1. Approccio chirurgico

1. Allinea e focalizza lo stereoscopio con il campo chirurgico. Regolare il cono del naso e fissarlo con del nastro adesivo in modo che sia posizionato lungo il bordo del campo visivo.
2. Con il topo sdraiato sul lato sinistro, fissa il bordo dell'orecchio destro al cono del naso, esponendo l'area dietro l'orecchio dove verrà praticata l'incisione. Assicurarsi che la vena auricolare posteriore viaggi orizzontalmente attraverso l'orecchio. Si noti che il corretto posizionamento dell'animale e il nastro adesivo dell'orecchio sono fondamentali per trovare rapidamente il nervo facciale.
3. Bagnare il pelo sopra e dietro l'orecchio con etanolo al 70% e radere il sito chirurgico usando un rasoio o una lama di bisturi. La pre-bagnatura del pelo facilita la rasatura in questa posizione anatomica.
4. Pulisci la pelle con una soluzione di iodio, come lo scrub chirurgico Betadine (7,5% di iodio povidone), seguito da etanolo al 70%. Ripetere questa pulizia altre due volte per disinfettare a fondo l'area.
5. Per determinare dove eseguire l'incisione, tracciare la vena auricolare posteriore dall'orecchio caudalmente all'area posteriore alla protuberanza dell'orecchio. Utilizzando le forbici a molla, praticare un'incisione di 4 mm 2 - 3 mm posteriormente alla protuberanza.
6. Sezionare il grasso sottocutaneo e la fascia utilizzando la dissezione smussata. Evitare il taglio diretto con le forbici perché i vasi sanguigni o il tessuto muscolare potrebbero essere facilmente danneggiati.
7. In caso di sanguinamento, applicare pressione sul sito chirurgico con un batuffolo di cotone sterile per almeno 30 secondi. Se si verifica una significativa perdita di liquidi, iniettare nel topo per via intraperitoneale fino a 0,5 ml di soluzione salina sterile allo 0,9% utilizzando un ago da 25 o 27 G.
8. Utilizzare diversi punti di riferimento chiave, il nervo accessorio spinale, il condotto uditivo e il muscolo digastrico anteriore (descritti di seguito), per localizzare il nervo facciale. Seziona intorno a questi punti di riferimento fino a visualizzare i rami del nervo facciale. Il nervo apparirà come una significativa struttura bianca solida quando viene rivelato e uno strato di fascia lo aderisce alle strutture sottostanti.
   1. Trova il nervo accessorio spinale, che viaggia dalla porzione caudale del cranio per innervare il muscolo trapezio una volta sezionato il grasso sottocutaneo e la fascia. Il nervo facciale è profondo rispetto al nervo accessorio spinale.
   2. Trova il condotto uditivo cartilagineo che sembra bianco perlaceo e può essere visto rostrale al nervo facciale.
   3. Trova il ventre muscolare del muscolo digastrico anteriore che si trova sopra e caudale al nervo facciale.
9. Quando vengono visualizzati i rami principali del nervo facciale, tracciarli dorsalmente per trovare la loro origine dal forame stilomastoideo. Utilizzando la pinza Dumont a punta fine #5/45 per mantenere aperto il sito chirurgico, far avanzare le punte delle forbici a molla seguendo il percorso del nervo, quindi spostare la pinza dorsalmente per mantenere aperta l'area appena avanzata.
10. Visualizza il tronco del nervo facciale con i rami zigomatici, buccali e mandibolari marginali a questo punto.
    NOTA: Il ramo temporale si troverà più vicino al forame. Il nervo mandibolare marginale si ramifica nelle sue parti superiore e inferiore più vicine alla mascella, quindi quei rami nervosi non saranno visibili a questo livello.
    1. Se si esegue una lesione da schiacciamento, utilizzare la pinza Dumont #5/45 per comprimere il nervo per 30 secondi utilizzando una pressione costante per recidere tutti gli assoni, quindi ripetere questo schiacciamento con un secondo angolo perpendicolare al primo sito di schiacciamento. Evitare di applicare quantità variabili di pressione durante i 30 secondi di schiacciamento, altrimenti la ferita sarà incoerente tra gli animali.

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Stereo Microscope	Leica	M60
Nastro di etichettatura	Fisher Scientific	15-952
Vannas-Tübingen Spring Scissors - Dritto/Affilato/8.5cm/5mm tagliente	Fine Science Tools	15003-08	Sterilizzare prima dell'uso
Dumont #5/45 Pinze - Standard punte/Angolato 45°/Dumoxel/11cm	Strumenti di Fine Science	11251-35	Sterilizzare prima dell'uso
0.9% Iniezione di Cloruro di Sodio, USP	Hospira	0409-4888-10
Betadine, 16 oz, con dispenser	Fisher Scientific	19-027132
70% Etanolo			<

td style='height:15.5pt;width:193pt;'>Sterilizzatore di perline di vetro