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Tutte le procedure che coinvolgono modelli animali sono state esaminate dal comitato istituzionale locale per la cura degli animali e dal comitato di revisione veterinaria JoVE.
1. Posizionamento di clip per aneurisma
- Posizionare una clip per aneurisma di ratto da 30 G su ciascuna arteria uterina. Garantire l'arresto del flusso sanguigno, compresi i polsi prossimali e distali, e l'oscuramento dei vasi uterini, comprese le singole placenta. Coprire le corna esposte e l'intero campo chirurgico con una garza e irrigare con soluzione fisiologica sterile. Irrigare il campo ogni 10 minuti circa per mantenerlo umido.
- Trascorsi i 60 min, togliete la garza e irrigate il campo. Assicurarsi che le corna e i vasi uterini siano adeguatamente inumiditi per una corretta rimozione della clip. Rimuovere delicatamente ogni clip per aneurisma utilizzando una pinza. Fare attenzione a non causare traumi al vaso e mantenere l'integrità dei tessuti durante la rimozione.
- Irrigare accuratamente le corna uterine e il campo, avendo cura di rimuovere eventuali fili di garza vaganti dalle sacche amniotiche.
2. Iniezione di lipopolisaccaride nelle sacche amniotiche
- Alla base di ogni singolo sacco amniotico, appena anteriormente alla placca placentare, iniettare 100 μl di lipopolisaccaride (LPS) (4 μg/sac) con il colorante blu di Evan diluito nel liquido amniotico. Utilizzare una pinza smussata per stabilizzare e ruotare ogni sacco amniotico in una posizione ottimale per l'iniezione. Diluire Il colorante blu di Evan è un agente di contrasto utile per confermare il corretto posizionamento e iniezione della siringa.
NOTA: Utilizzare solo una siringa da insulina ultrasottile da 0,3 ml con un ago da 8 mm e 31 G per le iniezioni intra-amniotiche. L'uso di aghi di calibro maggiore provocherà la perdita cronica di liquido amniotico, la morte fetale e il riassorbimento della gravidanza. Piccole quantità di perdita di liquido amniotico dopo la rimozione della siringa possono essere mitigate mediante una pressione diretta sul sacco amniotico. Alcuni feti di ratto possono tollerare un certo grado di oligoidramnios. Tuttavia, la perdita acuta di liquido amniotico da una puntura con aghi di grosso calibro o una puntura accidentale con conseguente perdita cronica di liquidi provoca la perdita fetale e, nei casi più gravi, la perdita di gravidanze vicine. - Irrigare le corna uterine 3 volte con soluzione fisiologica sterile.
3. Chiusura della laparotomia
- Utilizzando una pinza, riportare con cura le corna uterine nella cavità peritoneale. Garantendo uno spazio adeguato tra le sacche amniotiche e l'incisione della linea mediana, riapprossimare i bordi dello strato muscolo-fasciale utilizzando una sutura di seta 3-0. Prestare attenzione al posizionamento delle sacche amniotiche durante la chiusura dell'incisione muscolare. Fare attenzione a non suturare dentro o attraverso una sacca.
- Riapprossimare lo strato cutaneo, utilizzando una sutura di seta 3-0 in esecuzione, chiudendo lo strato cutaneo.
NOTA: La laparotomia deve essere chiusa in due strati di suture continue per consentire l'espansione della pelle e dei muscoli con l'aumentare della gestazione. Le suture continue consentono di distribuire uniformemente la tensione della ferita. Le suture interrotte sono meno desiderate in quanto i nodi multipli sono irritanti e possono essere facilmente masticati dal ratto dopo essersi ripresi dall'anestesia. Le graffette chirurgiche non sono desiderate. Le code dei nodi chirurgici devono essere tagliate molto corte (<3 mm). - Iniettare 1 ml di bupivacaina allo 0,125% per via sottocutanea attorno ai bordi della ferita utilizzando un ago da 26 G. Somministrare una dose di 0,1 mg/kg di buprenorfina per via sottocutanea sulla nuca.
- Spegnere l'isoflurano e asciugare il ratto con un asciugamano se necessario. Metti il ratto in una gabbia domestica pulita e monitora il suo recupero dall'anestesia. Assicurarsi che il ratto non diventi ipotermico.