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Tutte le procedure che coinvolgono modelli animali sono state esaminate dal comitato istituzionale locale per la cura degli animali e dal comitato di revisione veterinaria di JoVE.
1. Localizzazione e laminectomia della 9a vertebra toracica (T9)
NOTA: I topi femmina C57BL/6J di 9-10 settimane sono stati acquistati dalla Jinan Pengyue Experimental Animal Company (Jinan, Cina).
- Autoclave una serie di strumenti chirurgici per l'esperimento e sterilizza il tavolo operatorio con alcol al 75% prima dell'intervento.
- Iniettare buprenorfina per analgesia (0.05-2.0 mg/kg, per via sottocutanea) 30 minuti prima dell'anestesia per operazioni di lesione. Quindi, anestetizzare il topo con isoflurano (induzione: ~3-5%, mantenimento: ~1,5-2%). Controlla se l'animale è completamente anestetizzato dai riflessi della coda o del pizzico delle dita. Una volta che l'anestesia è in vigore, adagiare il topo in posizione prona in una parte designata del tavolo operatorio e rivestire la cornea con un unguento oftalmico (applicare un unguento oftalmico sulle cornee per proteggere gli occhi dalla secchezza durante l'intervento chirurgico).
- Radere i peli dalla caudale al rostrale con un rasoio elettrico sulla colonna vertebrale toracolombare. Sterilizzare la pelle più volte con movimenti circolari con iodoforo per 30 s, seguito da alcol al 75%. Applicare un telo chirurgico sterile e praticare un'incisione longitudinale di circa 1,5 cm sulla pelle da circa la 6a vertebra toracica (T6) alla13a vertebra toracica (T13) con un bisturi e una lama.
NOTA: Palpare lungo il margine costale fino alla linea mediana, dove si trova la 12avertebra toracica (T12) - T13 spazio interspinoso. Fai un'incisione di 1,5 cm sul rostrale e l'incisione è approssimativamente a filo con le vertebre T6-T13.
- Esplora la13a costola su un lato dalla parte ossea sotto il microscopio operatorio. Esplora il processo spinoso nella linea mediana toccando leggermente l'area dell'angolo costovertebrale e poi verso il rostrale per individuare lo spazio interspinoso del T12-T13. Esplora lo spazio interspinale della T9 - 10avertebra toracica (T10) dallo spazio del T12-T13 al lato rostrale. (Figura 1A, 2A)
- Seziona il muscolo paraspinale lungo il processo spinoso del T9 fino alle faccette articolari anteriori e posteriori di entrambi i lati con micro forbici (Figura 2B). Ritrarre i muscoli paraspinali con micro-divaricatori e pulire i tessuti molli sulla lamina e nello spazio interspinaledell'8a vertebra toracica (T8) - T9 e T9-T10 con micro forbici.
- Esegui la laminectomia T9, blocca il processo spinoso di T9 con una pinza per microchirurgia, sollevalo leggermente, inserisci le micro forbici parallelamente lungo il lato dorsolaterale destro della lamina, evitando danni al midollo spinale, e taglia la lamina con micro forbici. Ripeti sul lato sinistro e il midollo spinale può essere esposto (Figura 1B, 2C).
- Prima di fissare la vertebra, allenta il braccio universale e blocca lentamente le articolazioni delle faccette dal 9° al 10° su entrambi i lati della vertebra con la pinza micro zanzara dello stabilizzatore vertebrale. Stringi le viti sulla pinza per micro zanzare e la vertebra è così stabilizzata. Regolare il midollo spinale sul piano orizzontale, stringere il braccio universale e fissare la vertebra (Figura 2D).
2. Lesione da contusione T9
Una volta che il midollo spinale di livello T9 è esposto e la vertebra è fissata, mira al midollo spinale con la punta all'interno del manicotto sotto il microscopico operativo (Figura 2E).- Controlla se la superficie della punta è parallela al midollo spinale dagli aspetti posteriori e laterali del midollo spinale poiché è facile osservare la relazione tra il midollo spinale e la punta al microscopio, e il tavolo operatorio può essere ruotato facilmente.
- Controlla se la superficie della punta è parallela ai bordi bilaterali della lamina risparmiata prima che la punta sia a contatto con il midollo spinale dopo la laminectomia poiché è un piano di riferimento naturale parallelo al midollo spinale.
- Dopo aver individuato lo spazio interspinoso del T12-T13, abbassa il manicotto fino a quando l'estremità dell'impattatore è coerente con il segno sulla finestra di osservazione e viene raggiunta l'altezza specificata di 22 mm. Estrarre il perno di trazione per rilasciare il peso (1,3 g, 2,0 g o 2,7 g a seconda del gruppo, con ogni gruppo che include 3 mouse e ogni gruppo che ha un mouse per ogni punto temporale).
NOTA: Il midollo spinale dovrebbe essere parallelo al suolo e perpendicolare alla punta; spostare il tavolo operatorio per garantire il campo visivo microscopico, poiché il tavolo è molto compatto. - Rimuovi l'impattatore quando la contusione è terminata e osserva il grado di lesione del midollo spinale (SCI) sotto il microscopio operatorio. Nel gruppo lieve, si può notare un'alterazione del colore rosso chiaro, mentre nel gruppo moderato, il sito della lesione mostra rosso scuro in 3-4 s e, possibilmente, si può osservare l'eminenza. Nel gruppo grave, le manifestazioni rosso scuro possono comparire immediatamente e si manifesta un'evidente eminenza nella dura madre, ma la dura madre è ancora in una forma consistente (Figura 2F).
