Generazione di un modello murino con una lesione del midollo spinale

Tutte le procedure che coinvolgono modelli animali sono state esaminate dal comitato istituzionale locale per la cura degli animali e dal comitato di revisione veterinaria JoVE.

1. Preparazione degli strumenti chirurgici e non chirurgici

1. Sterilizzare gli strumenti chirurgici e non chirurgici in autoclave.
2. Pulire il tavolo operatorio chirurgico con etanolo al 70% e riscaldare un termoforo a 37 °C.
3. Posizionare il termoforo sul tavolo operatorio e coprirlo con teli chirurgici sterili.
   NOTA: In tutte le procedure di sopravvivenza, la tecnica "No Touch" viene utilizzata qui per mantenere la sterilità.

2. Preparazione degli animali ed esecuzione della laminectomia spinale T9-T10

1. Procurarsi topi maschi adulti (Balb/c) di 10 settimane. Indurre l'anestesia in ogni animale utilizzando un inalatore, iniziando con isoflurano al 5% e poi diminuendo al 2-3% per mantenere la sedazione per il resto delle procedure.
2. Confermare l'anestesia completa non suscitando alcuna risposta a una stimolazione nocicecezione indotta dal pizzico della coda/zampa.
3. Radere i peli sopra il dorso (dalla testa alla coda) con un tagliacapelli elettrico, quindi applicare la crema depilatoria (3 min) per rimuovere i peli rimanenti. Infine, lavare il dorso con acqua corrente/macchia bagnata e riportare gli animali nelle loro gabbie.
   NOTA: Questo è necessario per evitare ulteriori irritazioni alla pelle e contaminazioni chimiche al momento della ferita della pelle
4. Il giorno successivo, applica un unguento oftalmico sulle cornee per proteggere gli occhi dalla secchezza durante la procedura chirurgica. Quindi, strofinare la pelle con 3 preparati alternativi di scrub betadine ed etanolo al 70%.
5. Con un bisturi, eseguire un'incisione cutanea (~1,0-1,5 cm) lungo la linea mediana sul retro a livello delle vertebre T8-T12.
   NOTA: Il livello delle vertebre è identificato contando a ritroso la vertebra da T13 utilizzando la posizione delle costole fluttuanti che corrispondono alla vertebra T13.
6. Eliminare il tessuto adiposo sottocutaneo per accedere ai muscoli paraspinali, quindi sezionarli lentamente per esporre i processi spinosi e le lamine su entrambi i lati.
   NOTA: Esegui questa procedura con molta attenzione per evitare sanguinamenti eccessivi o qualsiasi lesione al midollo spinale a questo punto.
7. Eseguire una laminectomia per esporre il midollo spinale (vertebre T9-T10) staccando delicatamente la lamina spinale utilizzando una pinza per microdissezione.
   NOTA: Eseguire la laminectomia in modo che un eccesso del midollo spinale sia esposto per facilitare la creazione della lesione. Nel gruppo di controllo viene eseguita solo la laminectomia.

3. Esecuzione della lesione completa del midollo spinale (SCI) T9-T10

1. Usando una pinza, fissare la colonna vertebrale a T8 e sollevare per esagerare la curvatura spinale.
2. Utilizzando le forbici sottili, sezionare il midollo spinale tra la vertebra T9 e T10 fino al pavimento del canale vertebrale per garantire una transezione completa.
3. Dopo aver osservato la transezione completa al microscopio operatorio, applicare un pezzo di grasso sottocutaneo sul sito di laminectomia per fornire una protezione aggiuntiva al midollo spinale prima della chiusura del sito chirurgico.
4. Infine, chiudere la ferita e suturare i muscoli paravertebrali e la fascia superficiale utilizzando suture continue, quindi chiudere la pelle utilizzando clip di sutura.
5. Dopo la lesione midollare, osservare il movimento intestinale il giorno successivo; Tuttavia, gestire la vescica urinaria mediante l'evacuazione manuale della vescica.
   NOTA: La Bassa Mouse Scale (BMS) può essere utilizzata per monitorare l'andamento del recupero funzionale degli arti posteriori post-lesione midollare il giorno 2 e poi settimanalmente.