Un metodo di pulizia del tessuto idrofobico per un campione di tessuto cerebrale di ratto

Abstract

Fonte: Kirchner, K.N., et al., Un metodo di pulizia del tessuto idrofobico per il tessuto cerebrale di ratto. J. Vis. Exp. (2020).

Questo video mostra il metodo di pulizia del tessuto idrofobico di un campione di tessuto cerebrale di ratto. Il campione viene disidratato in sequenza in metanolo, trattato con una miscela di diclorometano e metanolo per sciogliere lipidi e pigmenti e trasferito in etere dibenzilico per la completa pulizia dei tessuti, consentendo un imaging dettagliato senza sezionamento sottile.

Protocollo

Tutte le procedure che coinvolgono campioni di animali sono state esaminate e approvate dal comitato di revisione etica degli animali appropriato.

1. Pulizia dei tessuti

1. Incubare il campione in una soluzione di metanolo al 20% e acqua deionizzata all'80% per 1 ora a temperatura ambiente (RT).
2. Incubare il campione in una soluzione di metanolo al 40% / acqua deionizzata al 60% per 1 ora a RT.
3. Incubare il campione in una soluzione di metanolo al 60% / acqua deionizzata al 40% per 1 ora a RT.
4. Incubare il campione in una soluzione di metanolo all'80% / acqua deionizzata al 20% per 1 ora a RT.
5. Incubare il campione in metanolo al 100% per 1 ora a RT.
6. Incubare in metanolo fresco al 100% per una notte a RT.
7. Incubare in diclorometano al 66% (DCM)/ metanolo al 33% per 3 ore, con agitazione, a RT.
8. Incubare in etere dibenzilico (DBE) senza agitare. Lasciare il campione in DBE fino a quando non è limpido e conservarlo in DBE fino all'imaging.

Materiali

DBE	Sigma-Aldrich	108014-1KG
DCM	Sigma-Aldrich	270997-100mL
Methanol	Sigma-Aldrich	34860-1l-R