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Tutte le procedure che coinvolgono campioni di animali sono state esaminate e approvate dal comitato di revisione etica degli animali appropriato.
1. Preparazione della camera
NOTA: Ogni campione richiede un vetrino con una camera di imaging in cui verrà posizionato il campione.
- Posizionare il campione al centro del vetrino.
- Utilizzando una pistola per colla a caldo, creare pareti ai bordi dello scivolo, alte quasi quanto il tessuto. Assicurati di lasciare un piccolo spazio (circa 5 mm) in uno degli angoli (Figura 1A, B).
- Applicare 1-2 gocce della soluzione di corrispondenza dell'indice di rifrazione o RIMS sul campione per mantenere umida la superficie superiore e prevenire la formazione di bolle tra il vetrino coprioggetti e il tessuto.
- Subito dopo aver applicato le gocce RIMS (Refractive index matching solution), aggiungere l'ultimo strato di colla a caldo alle pareti (in modo che raggiungano l'altezza del cervello/fetta) e procedere immediatamente (mentre la colla a caldo è ancora liquida) al passaggio 1.5.
- Sigillare la parte superiore con un vetrino coprioggetti, posizionandolo il più uniformemente possibile sulla parte superiore dello strato di colla a caldo ancora caldo (Figura 1C).
- Riempire la camera con i RIMS attraverso lo spazio lasciato nelle pareti di colla a caldo (Figura 1D, E).
- Chiudi lo spazio con la colla a caldo. Non lasciare aria all'interno (Figura 1F).
- Se le pareti di colla a caldo si estendono oltre i bordi del vetrino, tagliare i bordi di estensione (Figura 1G).
- Se l'obiettivo utilizzato per l'imaging è immerso, aggiungere altri 2-3 mm di colla alle pareti sopra il vetrino coprioggetti in modo che la soluzione di immersione duri più a lungo (Figura 1H).
