Microscopia a due fotoni di astrociti e neuroni eccitatori in un tessuto ippocampale di topo cancellato

Abstract

Fonte: Refaeli, R., et al., Indagine sull'interazione spaziale tra astrociti e neuroni in cervelli chiariti. J. Vis. Exp. (2022)

Il video mostra la preparazione di una camera e il neuroimaging del tessuto ippocampale di topo ripulito utilizzando la microscopia a due fotoni per visualizzare le interazioni spaziali tra astrociti marcati in fluorescenza e neuroni eccitatori.

Protocollo

Tutte le procedure che coinvolgono campioni di animali sono state esaminate e approvate dal comitato di revisione etica degli animali appropriato.

Risultati

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo Nome Azienda Numero di catalogo Commenti AAV1-GFAP::TdTomatoELSC Vector Core Facility (EVCF) Vettore virale utilizzato per rilevare gli astrocitiAAV5-CaMKII::eGFPELSC Vector Core Facility (EVCF) Vettore virale utilizzato per rilevare i neuroniAAV5-CaMKII::H2B-eGFPELSC Vector Core Facility (EVCF) Vettore virale utilizzato per rilevare i nuclei neuronaliAAV5-CaMKII::TdTomatoELSC Vector Core Facility (EVCF) Vettore virale utilizzato per rilevare i neuroniImaris softwareBitplane, UK Un software che permette l'analisi 3D delle immaginiRapiClearSunJin lab#RC147002 RapiClear CSSunJin lab#RCCS002 SyGlass software Un software che consente l'analisi 3D delle immagini utilizzando la realtà virtualeMicroscopio a due fotoniNeurolabwareTi:laser zaffiro (Chameleon Discovery TPC, Coherent), tubi fotomoltiplicatori GaAsP (Hamamatsu, H10770-40), filtro passa-banda (Semrock), obiettivo 16x ad immersione in acqua (Nikon, 0.8 NA)VA-044 InitiatorWako#011-19365