Imaging a bioluminescenza in un modello murino EAE

Abstract

Source: Schmitz, K., et al., Bioluminescenza e imaging nel vicino infrarosso della neurite ottica e dell'infiammazione cerebrale nel modello EAE della sclerosi multipla nei topi. J. Vis. Exp. (2017).

Questo video dimostra il metodo per visualizzare e monitorare l'encefalomielite autoimmune sperimentale o l'infiammazione indotta da EAE nel nervo ottico utilizzando Imaging a bioluminescenza. Include il posizionamento del mouse, l'iniezione del reagente e l'acquisizione di immagini sequenziali per monitorare i cambiamenti della bioluminescenza nel tempo.

Protocollo

Tutte le procedure che coinvolgono modelli animali sono state esaminate dal comitato istituzionale locale per la cura degli animali e dal comitato di revisione veterinaria JoVE.

1. Imaging bioluminescente della neurite ottica e dell'infiammazione cerebrale

1. Configurazione del sistema di imaging
   1. Eseguire l'imaging in vivo con qualsiasi apparecchiatura che consenta l'analisi della bioluminescenza e dei segnali nel vicino infrarosso.
   2. Mantenere i topi sotto anestesia con isoflurano al 2 - 2,5% durante tutte le procedure di imaging.
   3. Posizionare uno o due mouse uno accanto all'altro nell'apparecchio utilizzando le alimentazioni di gas centrali. Posiziona la colonna vertebrale superiore al centro.
   4. Per valutare gli effetti dei farmaci, confrontare coppie di topi utilizzando due topi contemporaneamente, uno per gruppo. Questo è importante per l'imaging bioluminescente.
   5. Proteggi il sito di immunizzazione con un panno nero e scatta una fotografia e un'immagine di base per valutare il corretto posizionamento del topo/dei topi. Per tutte le immagini, utilizzare la messa a fuoco B a una distanza di 6,5 cm dalla fotocamera.
2. Iniezione e imaging della sonda di infiammazione bioluminescente
   1. Utilizzare le impostazioni del sistema di imaging in vivo: Epi-BLI, filtro Em aperto, blocco filtro Ex, fstop 1, binning 8, messa a fuoco B = 6,5 cm, esposizione pubblicitaria 120 s; Scatta un'immagine di base.
   2. Iniettare 100 μL i.p. di reagente chemiluminescente pronto all'uso (40 mg/mL). Mescolare bene prima di riempire la siringa.
   3. Acquisire immagini di bioluminescenza 5, 10 e 15 minuti dopo l'iniezione. L'andamento temporale del picco bioluminescente varia da animale a animale.
      NOTA: Il picco si verificherà 5 - 10 minuti dopo l'iniezione; Un calo a 15 minuti indica che non sono necessarie ulteriori immagini. Utilizzare coppie di mouse di gruppi di controllo e di trattamento per eliminare distorsioni minori dovute a diversi decorsi temporali.
   4. Compila le descrizioni pertinenti all'esperimento. Osserva una finestra di dialogo che si apre automaticamente; Include informazioni, come il ceppo del topo, il sesso, il punto temporale, l'ora dell'iniezione della sonda, il gruppo, ecc. Salva i file tutti in una cartella; Avranno i tag temporali e tutte le descrizioni.

Materiali