Imaging microendoscopico del calcio in tempo reale in un topo che si muove liberamente

Abstract

Fonte: Lee, H. et. al., Imaging di calcio in vivo riuscito con un microscopio miniaturizzato montato sulla testa nell'amigdala di un topo che si comporta liberamente. J. Vis. Exp. (2020)

Questo video mostra l'imaging del calcio in vivo in un topo utilizzando un indice di rifrazione a gradiente, o lente GRIN, e un microscopio miniaturizzato. La configurazione combina la fissazione della testa all'interno di un sistema di gabbie mobili senza attrito, stimolando i neuroni e innescando l'afflusso di ioni calcio. La lente GRIN cattura la segnalazione del calcio nel cervello, consentendo la visualizzazione in tempo reale dell'attività neuronale.

Protocollo

Tutte le procedure che coinvolgono modelli animali sono state esaminate dal comitato istituzionale locale per la cura degli animali e dal comitato di revisione veterinaria JoVE.

NOTA: Questo protocollo consiste in sei fasi principali: chirurgia dell'iniezione di virus, chirurgia dell'impianto di lenti con indice di rifrazione a gradiente (GRIN), convalida dell'impianto di lenti GRIN, attacco della piastra di base, registrazione ottica del segnale GCaMP (fusione della proteina fluorescente verde (GFP), calmodulina (CaM) e M13, una sequenza peptidica dalla chinasi della catena leggera della miosina) durante un test comportamentale ed elaborazione dei dati (Figura 1A). Fatta eccezione per la chirurgia, viene utilizzato il pacchetto software commerciale (Inscopix).

1. Chirurgia stereotassica – Iniezione di virus adeno-associato (AAV)
NOTA: Il ceppo di topo utilizzato in questa procedura chirurgica è C57BL6/J. Il corpo dell'animale viene coperto con un telo sterile durante l'intervento chirurgico e tutte le fasi del protocollo vengono eseguite indossando guanti sterili. Di solito non vengono eseguiti più interventi chirurgici nello stesso giorno. Tuttavia, se più topi devono sottoporsi allo stesso intervento chirurgico nello stesso giorno, utilizzare un set separato di strumenti chirurgici autoclavati per ciascun topo e il 70% di etanolo per disinfettare gli strumenti chirurgici tra i topi. Per mantenere il mouse caldo durante la procedura chirurgica, il topo viene coperto con una coperta chirurgica su misura dopo essere stato fissato al telaio stereotassico.

1. Disinfettare tutti gli strumenti chirurgici necessari con etanolo al 70% e preparare una siringa Hamilton e una pipetta di vetro. Riempire la pipetta di vetro con acqua distillata.
   NOTA: Tutti gli strumenti chirurgici utilizzati nel protocollo sono sterilizzati in autoclave. Poiché la lente GRIN e le viti del cranio non possono essere sterilizzate in autoclave, l'etanolo al 70% viene utilizzato come disinfettante per prevenire l'infiammazione. Sebbene non siano state provate, possono essere utilizzate altre forme di sterilizzazione, ad esempio la sterilizzazione a gas o chimica.
2. Anestetizzare il topo con pentobarbital (83 mg∙kg-1 di peso corporeo) mediante iniezione intraperitoneale. Dopo che il topo ha perso conoscenza, rasa la pelliccia sul cranio.
3. Pulisci la pelle sopra il cranio con etanolo al 70% e fissa il mouse al telaio stereotassico. Rimuovere con cura la pelle e pulire la superficie del cranio con una soluzione di perossido di idrogeno al 35% utilizzando un applicatore con punta di cotone. Applicare un unguento lubrificante per gli occhi per prevenire l'essiccazione corneale durante l'intervento chirurgico.
   NOTA: Sebbene di solito non ci siano problemi con l'uso di etanolo al 70% solo per la preparazione asettica della pelle, si consiglia di utilizzare 3 cicli alternati di disinfettante, ad esempio iodofori o soluzione di clorexidina, ed etanolo al 70%. In questo protocollo viene utilizzata una concentrazione più elevata di perossido di idrogeno per assicurarsi che il tessuto connettivo sul cranio del topo venga rimosso il più completamente possibile, il che è fondamentale per ridurre gli artefatti di movimento durante l'imaging successivo perché il tessuto connettivo sul cranio interferisce con un solido fissaggio della piastra di base al cranio. Va notato che il 35% di perossido di idrogeno è molto più alto di quello normalmente utilizzato (3%).
4. Fissare il perno con un supporto per sonda stereotassico. Allineare l'altezza della bregma e della lambda con il perno.
5. Trova la posizione specifica sul cranio del topo per la craniotomia.
   NOTA: Le coordinate dell'amigdala laterale (LA) per l'iniezione del virus sono (AP, ML, DV) = (-1,6 mm, -3,5 mm, -4,3 mm) da bregma in questo protocollo (AP; Anteriore-Posteriore, ML; Mediale-Laterale, DV; Dorsale-Ventrale, ogni abbreviazione indica la distanza assiale relativa dal bregma). Le coordinate devono essere ottimizzate per ogni condizione sperimentale.
6. Forare la superficie del cranio (Figura 1B). Lavare le frazioni del cranio con soluzione salina tamponata con fosfato (PBS). Rimuovere lo strato rimanente utilizzando una pinza o un ago da 27 G.
   1. Quando fora il cranio, cerca di non toccare l'ultimo strato di dura dura per evitare di danneggiare la superficie del tessuto cerebrale. Una superficie cerebrale danneggiata provoca un'infiammazione intorno all'obiettivo, che induce gravi artefatti da movimento e un'elevata autofluorescenza durante la registrazione. La craniotomia è di 1,6 mm. La velocità di perforazione è di 18.000 giri/min e la dimensione della punta è di 0,6 mm.
7. Per abbassare la lente GRIN dalla superficie del tessuto cerebrale del sito perforato al sito dell'amigdala target, calcolare la distanza denominata "Valore A" sottraendo la differenza DV tra la bregma e la superficie cerebrale esposta dalla coordinata DV dell'impianto della lente, che viene impostata in base alla bregma (4,2 mm in questo caso, Figura 1C).
8. Caricare 3 μL di olio minerale e 0,7 μL della soluzione del virus AAV nella pipetta di vetro.
   NOTA: L'olio minerale aiuta a separare la soluzione virale dall'acqua. 0,7 μL è un volume ottimizzato per l'iniezione del virus LA che può coprire completamente l'LA.
9. Rimuovere il perno dal supporto della sonda stereotassica e fissarvi la pipetta di vetro.
10. Localizzare la pipetta di vetro nel sito di iniezione indicato al punto 1.5. Inserire la pipetta di vetro nel tessuto cerebrale dopo che l'emorragia è completamente ferma.
11. Somministrare il virus attraverso una pipetta di vetro utilizzando una pompa per iniezione.
    NOTA: Il titolo del virus deve essere superiore a 1 x 1013 vg/mL per ottenere un numero sufficiente di cellule che esprimono GCaMP. La velocità di iniezione è di 0,1 μL/min e diffusa per 10 min. Se c'è sanguinamento, lavare la superficie cerebrale con PBS. Mantieni la superficie del cervello bagnata in questo passaggio.
12. Dopo aver terminato l'iniezione, rimuovere lentamente la pipetta di vetro.

2. Chirurgia stereotassica – Impianto di lenti GRIN
NOTA: La chirurgia dell'impianto di lenti GRIN è la fase più critica di questo protocollo. Poiché una velocità lenta e costante del movimento della lente GRIN è fondamentale per il successo dell'impianto della lente GRIN, un braccio chirurgico motorizzato può essere utile. Il braccio chirurgico motorizzato è un manipolatore stereotassico controllato da un software per computer. Sebbene in questo protocollo venga utilizzato il braccio motorizzato, è possibile utilizzare anche altri modi, purché la lente si muova costantemente e lentamente durante l'impianto. Informazioni dettagliate sul dispositivo sono nella Tabella dei materiali.

1. Forare il cranio per impiantare due viti del cranio. Lavare tutte le frazioni del cranio con PBS.
   NOTA: Per ridurre gli artefatti da movimento nell'imaging ottico successivo, sono necessarie almeno due viti. Le due viti del cranio e la posizione dell'impianto della lente GRIN formano un triangolo equilatero (Figura 1B). La dimensione della craniotomia dovrebbe adattarsi perfettamente al diametro della vite. In caso di sanguinamento, lavare la superficie sanguinante con PBS. La velocità di perforazione è di 18.000 giri/min e la dimensione della punta è di 0,6 mm.
2. Disinfettare le viti con etanolo al 70% per prevenire l'infiammazione. Impiantare le viti il più in profondità possibile.
   NOTA: Le viti devono essere fissate saldamente senza ulteriore adesione, come il cemento.
3. Installare un braccio chirurgico motorizzato sul telaio stereotassico. Collegare l'hardware necessario al computer portatile in cui è installato il software di controllo (Tabella dei materiali).
4. Prima di abbassare la lente GRIN, prepararsi a creare una traccia dell'ago con un ago da 26 G.
   NOTA: La traccia dell'ago è una sorta di traccia guida che aiuta a impiantare la lente GRIN relativamente spessa nelle regioni cerebrali profonde come l'amigdala senza causare gravi distorsioni della struttura cerebrale lungo il percorso di iniezione. Questa traccia di guida è chiamata traccia dell'ago perché è realizzata mediante una procedura di abbassamento e sollevamento di un ago relativamente sottile da 26 G.
5. Fissare il supporto della cannula per tenere saldamente l'ago sul telaio stereotassico.
6. Afferrare l'ago da 26 G con il supporto della cannula e calcolare le coordinate del sito di inserimento dell'ago.
   NOTA: In questo protocollo, le coordinate del sito di inserimento dell'ago sono 50 μm lateralmente dal sito di iniezione del virus (AP, ML, DV) = (-1,6 mm, -3,55 mm, -3,7 mm).
7. Accedi al software di controllo e completa la preparazione per la manipolazione della posizione dell'ago.
   1. Esegui il software di controllo e seleziona il pulsante Avvia nuovo progetto per avviare la sessione di controllo.
      NOTA: Nella sessione di controllo, ci sono diverse caselle vuote e pulsanti di menu. Le caselle vuote sono spazi di input per le coordinate. Dopo aver inserito le coordinate nelle caselle vuote, il braccio stereotassico motorizzato si muove facendo clic sul pulsante Vai a. Il pulsante Go To si trasforma in un pulsante STOP quando il braccio stereotassico è in movimento. Tra i vari pulsanti del menu, in questo protocollo è richiesto solo il pulsante Strumento.
   2. Fare clic sul pulsante Strumento. Calibrare il software di controllo facendo clic sul pulsante del menu Calibra il telaio. La calibrazione è il processo mediante il quale la posizione effettiva del manipolatore viene impostata come valori sul software Stereodrive.
8. Individuare la punta dell'ago sulla superficie esposta del cervello sulla superficie del cranio utilizzando un manipolatore stereotassico.
   NOTA: La velocità dell'ago viene impostata utilizzando il menu Velocità microdrive nel menu Strumenti. La velocità predefinita è 3,0 mm/s. Tuttavia, in questo passaggio si consiglia una velocità di 0,5 mm/s. Il movimento dell'ago è controllato dai tasti freccia.
9. Aggiungi 2-3 gocce di PBS per mantenere bagnata la superficie del cervello. Compila la casella vuota sullo schermo del computer con le coordinate DV appropriate del LA. Se la superficie del cervello è asciutta, ostacola la penetrazione dell'ago nel tessuto cerebrale.
10. Abbassare l'ago da 26 G facendo clic sul pulsante Vai a. Si arresta automaticamente quando l'ago raggiunge il sito di destinazione impostato dalle coordinate DV. La velocità dell'ago è di 100 μm/min. In caso di sanguinamento, fermare l'ago facendo clic sul pulsante STOP e lavare la superficie cerebrale con PBS. Mantieni la superficie del cervello bagnata in questo passaggio. Dopo che lo spurgo è stato interrotto, ricominciare ad abbassare.
11. Dopo che l'ago ha smesso completamente di muoversi, inserire 45,00 mm nella casella vuota sullo schermo del computer.
    NOTA: 45,00 mm è un valore della coordinata DV che fa tornare l'ago alla posizione iniziale.
12. Sollevare l'ago facendo clic sul pulsante Vai a. La velocità di movimento dell'ago è di 100-200 μm/min.
13. Dopo che l'ago smette di muoversi, rimuovere il PBS sulla superficie del cervello. Disinstallare l'ago e il supporto della cannula dal telaio stereotassico. Lo sperimentatore può fermare manualmente l'ago facendo clic sul pulsante STOP quando necessario.
14. Equipaggiare l'asta stereotassica con il supporto dell'obiettivo. Installare la lente GRIN sul supporto della lente.
    NOTA: In questo protocollo viene utilizzata la lente GRIN ottimizzata per il targeting della LA (0,6 mm di diametro, 7,3 mm di lunghezza). Se il supporto dell'obiettivo non è preparato, un modo alternativo è quello di utilizzare una clip bulldog per afferrare l'obiettivo GRIN.
15. Disinfettare la lente con etanolo al 70% e fissare l'asta stereotassica alle montature stereotassiche.
16. Individuare la punta della lente GRIN nel sito designato sulla superficie del cranio (stesso metodo descritto nel passaggio 2.8).
    NOTA: La coordinata della lente GRIN è (AP, ML, DV) = (-1,6 mm, -3,55 mm, -4,2 mm) (Figura 1C). La lente non deve toccare il cranio per evitare danni alla punta.
17. Calcolare la coordinata DV sottraendo il valore assoluto di "Valore A" dalla coordinata DV dell'impianto della lente descritta al punto 2.16.
18. Far cadere 2-3 gocce di PBS sulla superficie del cervello. Immettere 1000 μm per l'abbassamento e 300 μm per il sollevamento dell'obiettivo nella casella vuota sullo schermo del computer.
19. Ripetere l'abbassamento (1000 μm verso il basso) e il sollevamento (300 μm verso l'alto) della lente GRIN fino a raggiungere il sito target. Questa procedura su e giù viene utilizzata per aiutare a rilasciare la pressione generata all'interno del tessuto cerebrale a causa della procedura di abbassamento della lente che altrimenti può causare la distorsione delle strutture cerebrali lungo il percorso di impianto.
    NOTA: La velocità del movimento della lente GRIN è di 100 μm/min. Anche in caso di sanguinamento, non smettere di muovere la lente GRIN e lavare la superficie cerebrale con PBS. Mantieni la superficie del cervello bagnata in questo passaggio. Se la superficie del cervello è asciutta, il tessuto cerebrale si attacca alla superficie della lente GRIN e provoca la distorsione della struttura cerebrale.
20. Se la lente GRIN raggiunge il sito target, rimuovere il PBS e applicare con cura il cemento dentale resinoso attorno alla lente GRIN, alle viti e alla loro parete laterale (Figura 1D).
    NOTA: L'applicazione del cemento resinoso su tutto il cranio può ridurre gli artefatti da movimento. Al contrario, se il cemento resinoso copre accidentalmente i muscoli attaccati al cranio, aumenta gli artefatti di movimento.
21. Dopo che il cemento dentale in resina si è indurito, smontare la lente GRIN dal supporto della lente e applicare il cemento acrilico su tutto il cranio (Figura 1D).
22. Per fissare la piastra della testa, smontare il supporto dell'obiettivo dall'asta stereotassica e fissare la piastra della testa sulla punta dell'asta utilizzando dei nastri. Verificare che la piastra di testa sia orizzontale.
    NOTA: Una piastra di testa inclinata provoca una vista inclinata. Per il fissaggio della testa del mouse nel sistema di gabbia della casa mobile è necessaria una piastra per la testa (nella sezione di fissaggio della piastra di base). Se lo sperimentatore non utilizza il sistema, saltare questo passaggio (passaggio 2.22) e il passaggio successivo 2.23.
23. Abbassare lentamente l'asta finché la piastra della testa non si trova nella parte superiore del bracciale dell'obiettivo. Abbassare la piastra di testa di altri 1000 μm. Spostare la piastra della testa per la lente GRIN impiantata in modo che si trovi sul bordo destro dell'anello interno della piastra della testa.
    NOTA: La piastra della testa deve essere posizionata più in basso rispetto alla superficie della lente GRIN impiantata; in caso contrario, il microendoscopio non può avvicinarsi abbastanza alla lente GRIN impiantata per regolare il piano focale a causa del cemento acrilico.
24. Applicare cemento acrilico per fissare la piastra di testa agli strati di cemento (Figura 1D).
25. Applicare la pellicola di paraffina sulla superficie della lente GRIN impiantata per proteggere la superficie della lente dalla polvere. Quindi applicare un adesivo epossidico rimovibile sulla pellicola di paraffina per mantenere la pellicola di paraffina sulla superficie della lente.
26. Iniettare Carprofene, un analgesico (0,5 mg/mL in PBS), e Desametasone, un farmaco antinfiammatorio (0,02 mg/mL in PBS) soluzione, nella cavità peritoneale del topo.
    NOTA: La dose del farmaco dipende dal peso corporeo: Carprofene (5 mg∙kg-1 di peso corporeo) e Desametasone (0,2 mg∙kg-1 di peso corporeo). Sia il carprofene che il desametasone vengono somministrati dopo l'intervento chirurgico e una volta al giorno per 7 giorni dopo l'intervento.
27. Mescolare 0,3 mg/mL di amoxicillina, un antibiotico, nell'acqua della gabbia domestica per somministrare il farmaco per 1 settimana.
28. Rimetti il topo nella gabbia di casa e attendi 5-8 settimane per il recupero e la trasduzione del virus.
    NOTA: Il topo viene recuperato in una gabbia preriscaldata su una coperta elettrica fino a quando il topo non si sveglia dall'anestesia.

3. Convalida dell'impianto della lente GRIN
NOTA: La convalida dell'impianto della lente GRIN fornisce informazioni sul fatto che la lente GRIN impiantata sia in linea con le cellule che esprimono GCaMP. Sulla base di queste informazioni, lo sperimentatore risparmia tempo da processi dispendiosi in termini di tempo come il test comportamentale e l'elaborazione dei dati escludendo gli animali con impianto di lenti GRIN fuori bersaglio. Durante la procedura di convalida, le cellule con espressione di GCaMP devono essere focalizzate nel campo visivo di registrazione. In questa fase viene utilizzata una gabbia per case mobili. Una gabbia per case mobili è un apparecchio specializzato di forma rotonda che consente ai topi con la testa fissa di muovere liberamente le zampe durante la convalida dell'impianto della lente GRIN e dell'attacco della piastra di base. Un tavolo di sollevamento aereo in questo apparecchio, su cui sono posizionate le gambe dei topi fissati alla testa, consente tale libero movimento delle gambe, anche se la testa è fissa. Le cellule nel nucleo laterale dell'amigdala sono solitamente tranquille in uno stato di riposo o anestetizzato, quindi i segnali di fluorescenza GCaMP sono raramente rilevati in queste condizioni, il che rende molto difficile, a volte impossibile, trovare cellule che esprimono GCaMP durante la convalida dell'impianto della lente GRIN e dell'attacco della piastra di base. Tuttavia, il movimento delle gambe spesso produce segnali di fluorescenza GCaMP nelle cellule del nucleo laterale dell'amigdala e quindi può aiutare a localizzare il microscopio. Pertanto, la gabbia per case mobili viene utilizzata in questo protocollo.

1. Assemblare il manipolatore stereotassico nel sistema di gabbie per case mobili.
2. Anestetizzare il topo con gas isoflurano all'1,5%. Dopo che il mouse è completamente privo di sensi, posizionarlo sulla barra della testa del sistema di gabbie per case mobili.
3. Individua la gabbia di carbonio sotto il mouse. Chiudere la gabbia in carbonio e attivare il flusso d'aria per far muovere liberamente la gabbia senza attriti. Attendere qualche minuto fino a quando il mouse diventa attivo.
   NOTA: La velocità del flusso d'aria deve essere ottimizzata per ogni condizione sperimentale (qui, 100 L/min).
4. Rimuovere la pellicola di paraffina e il legame epossidico sulla superficie della lente GRIN impiantata e pulire la superficie della lente con etanolo al 70% utilizzando carta per lenti.
5. Preparare il software di acquisizione dati (DAQ) (ad es. Inscopix). Impostare le condizioni di imaging.
   NOTA: Il software DAQ viene utilizzato per controllare il microscopio (potenza del diodo a emissione di luce (LED), messa a fuoco dell'obiettivo, ecc.) e l'archiviazione dei dati.
   1. Accendi la scatola DAQ e collega un microscopio ad essa. Quindi, collegalo a un computer portatile direttamente utilizzando un cavo o tramite Internet wireless.
      NOTA: Il software DAQ è installato nell'hardware aggiuntivo chiamato DAQ box (ad esempio, Inscopix). Collegando il DAQ box al computer portatile, il software DAQ diventa accessibile in un computer portatile.
   2. Accedere al software DAQ tramite un browser Internet (si consiglia Firefox).
   3. Imposta tutti i dettagli necessari (data, ID del mouse, ecc.) nella sessione definita. Quindi fare clic su Salva e continua. Dopo il salvataggio, accedere alla sessione Esegui.
   4. Nella sessione di esecuzione, impostare le condizioni di imaging come il tempo di esposizione, il guadagno, la messa a fuoco elettronica e la potenza del LED di esposizione.
      NOTA: Il guadagno e la potenza del LED di esposizione possono variare a seconda delle condizioni di laboratorio. Il valore consigliato per la messa a fuoco elettrica è 500 e il tempo di esposizione è 50 ms. Non ci sono restrizioni per la modifica della potenza e del guadagno dei LED. Tuttavia, una maggiore intensità di luce può causare più sbiancamento. Il tempo di esposizione della registrazione determina la frequenza dei fotogrammi della registrazione video. Frame rate più elevati ridurranno l'intensità del segnale. I frame rate devono essere ottimizzati per i GECI utilizzati per l'imaging.
6. Per tenere il microscopio su un manipolatore stereotassico, collegare l'asta stereotassica con una pinza per microscopio al manipolatore stereotassico.
   NOTA: La pinza è un piccolo accessorio che può essere collegato all'apparato stereotassico per sostenere un corpo del microscopio per posizionarlo nella posizione del cervello bersaglio.
7. Afferrare il microscopio con la pinza del microscopio. Accendere la luce LED collegata al microscopio e allineare il microscopio verticalmente. Abbassare il microscopio durante l'osservazione dell'immagine fino a quando non viene visualizzata la superficie della lente GRIN impiantata.
8. Allineare il centro della lente GRIN impiantata con il centro della vista.
   NOTA: La convalida dell'impianto della lente GRIN può essere condotta in questa fase (menzionata nella sezione dei risultati, Figura 2B, Figura 2D, Figura 2F).
9. Acquisire l'immagine della superficie della lente GRIN impiantata (fare clic sul pulsante Prt Sc sulla tastiera). L'immagine della superficie della lente GRIN impiantata è necessaria per deselezionare i componenti non neuronali durante la successiva elaborazione dei dati (passaggio 6.8).
10. Trovare la posizione appropriata del microscopio. Sollevare lentamente la lente dell'obiettivo del microscopio mentre si osserva l'immagine per cercare le cellule con espressione GCaMP7b.
    NOTA: Potrebbe essere necessario regolare il guadagno dell'acquisizione dell'immagine o la potenza del LED di esposizione. La convalida dell'impianto della lente GRIN può essere condotta in questa fase (menzionata nella sezione dei risultati, Figura 2A, Figura 2C, Figura 2E).

Risultati

Figura 1: Flusso di lavoro schematico e diagrammi per la chirurgia stereotassica per l'imaging microendoscopico del calcio in vivo nell'LA. (A) Un flusso di lavoro schematico dell'imaging microendoscopico del calcio in vivo nel LA. (B) Un'immagine micros...

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo Nome Azienda Numero di catalogo Commenti 26G agoBD302002ChirurgiaAAV1-Syn-GCaMP7b-WPREAddgene104493-AAV1ChirurgiaAAV2/1-CaMKiiα-GFPsu misura ChirurgiaAcrilico-cemento dentale (Ortho-jet Acrylic Pink)Lang1334-pinkChirurgia e attacco piastra di baseManipolatore del flusso d'ariaNeurotarNTR000253-04Attacco piastra di baseAmoxicillinaSIGMAA8523-5GChirurgiaGabbia di carbonioNeurotar180mm x 70mmAttacco piastra di baseCarprofenSIGMAPHR1452-1GchirurgiaSoftware di elaborazione datiINSCOPIXSoftware di elaborazione dati INSCOPIX Attaccodella piastra di base e test di comportamentoDesametasoneSIGMAD1756-500MGTrapano chirurgicoSeyangmarathon-4Fresa chirurgicaELAUS1/2, Shank104ChirurgiaAgo di vetroWPIPG10165-4ChirurgiaLente GRIN (INSCOPIX Proview Lens Probe)INSCOPIX1050-002208Siringa Hamilton per chirurgia Hamilton84875Piastra per la testa per chirurgiaNeurotarModel 5Chirurgia Computer portatileSamsungNT950XBVPortalenti per chirurgia, asta stereotassica (kit di impianto INSCOPIX proview)INSCOPIX1050-004223Pinza permicroscopio per chirurgia INSCOPIX1050-002199Attacco per piastra di baseMicroscopio, software DAQ, hardwareINSCOPIXnVista 3.0Attacco per piastra di base e test del comportamentoGabbia domestica mobileNeurotarMHC V5Attacco per piastra di baseBraccio sterilizzatoNeurostarSoftwareperbraccio sterilizzato per chirurgia personalizzataNeurostarChirurgia personalizzataLegame epossidico rimovibileWPIKwik-CastChirurgiaCemento resinoso (Super-bond)Sun medicalSuper bond Chirurgia C&BVite cranicaStoelting51457ChirurgiaTelaio stereotassicoStoelting51600ChirurgiaManipolatore stereotassicoStoelting51600Attacco piastra di base