Visualizzazione dei trombi cerebrali di topo utilizzando l'imaging a fluorescenza nel vicino infrarosso

Tutte le procedure che coinvolgono campioni di animali sono state esaminate e approvate dal comitato di revisione etica degli animali appropriato.

1. Imaging del trombo del tessuto cerebrale con fluorescenza nel vicino infrarosso (NIRF)ex vivo

1. Dopo la decapitazione, rimuovere il cuoio capelluto e tagliare il cranio con le forbici dal forame magno fino alla sutura sagittale. Rimuovere la volta cranica sollevando con cautela i bordi del cranio inciso con le forbici, evitando lesioni al cervello sottostante, mettendo così a nudo gli emisferi.
2. Tagliare i nervi ottici nella base del cervello il più vicino possibile alla superficie del cervello perché potrebbero sovrapporsi al circolo delle arterie di Willis (COW) che dovrebbero essere visualizzate sull'imaging fluorescente nel vicino infrarosso (NIRF). Quindi, per visualizzare l'arteria cerebrale media (MCA) / arteria cerebrale anteriore (ACA) / arteria carotide interna distale (ICA)a forma di Y, per l'imaging del trombo NIRF, tagliare le ICA distali il più lontano possibile dalla superficie cerebrale dopo aver compresso delicatamente la base cerebellare per esporre i punti di taglio (Figura 1A).
3. Eseguire l'imaging NIRF (eccitazione/emissione, 675 / 690 nm; esposizione di 1 secondo) del tessuto cerebrale rimosso con la base rivolta verso l'alto (Figura 1B, C), che visualizza i tromboemboli marcati in fluorescenza nelle arterie della COW (Figura 1D). Quindi, eseguire ulteriori immagini con il vertice del cervello rivolto verso l'alto, che visualizza i tromboemboli corticali. Evita di seccare il cervello mettendo qualche goccia di soluzione salina sul tessuto.

Figura 1: Panoramica dell'imaging fluorescente nelvicino infrarosso (NIRF) di Ex Viv o di tromboemboli cerebrali. (A e B) Un tessuto cerebrale rappresentativo è stato rimosso da un topo con un ictus tromboembolico. Prendere precauzioni per non perdere i tromboemboli (freccia rossa) nell'area di biforcazione dell'arteria cerebrale media (MCA) – arteria cerebrale anteriore (ACA) dell'arteria carotide interna distale (ICA, frecce blu) durante la rimozione del cervello. (C e D) Ex vivo Imaging a trombi NIRF. Il tessuto cerebrale viene posizionato all'interno della camera a tenuta di luce di un imager NIRF (C) per la visualizzazione del trombo (freccia rossa in D) pre-marcato con il marcatore fluorescente C15 di cianina 5.5 (Cy5.5) prima dell'occlusione embolica dell'area di biforcazione MCA-ACA.