Imaging tridimensionale di astrociti immunomarcati mediante microscopia confocale

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Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Fonte: Bagheri, M., et. al. Protocollo per l'Analisi Morfometrica Confocale Tridimensionale degli Astrociti. J. Vis. Exp. (2015).

Questo video mostra l'imaging di astrociti marcati in fluorescenza in una sezione cerebrale di topo utilizzando un microscopio confocale. La sezione del cervello viene posizionata sotto la lente dell'obiettivo appropriata e vengono selezionati i fluorofori e i filtri adatti. Dopo aver ottimizzato automaticamente l'esposizione, vengono definiti i parametri di scansione per garantire immagini 2D ad alta risoluzione. I parametri Z-stack vengono configurati e le immagini 3D vengono acquisite.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Tutte le procedure che coinvolgono campioni di animali sono state esaminate e approvate dal comitato di revisione etica degli animali appropriato.

1. Animali, chirurgia e preparazione dei campioni

NOTA: Preparare il tessuto cerebrale per l'analisi microscopica confocale tridimensionale (3D).

Dividere gli animali in modo casuale in due gruppi: amiloide-beta (Aβ)_1-40\iniezione (n = 8) e Aβ_1-40\iniezione con trattamento con genisteina (n = 8); somministrare genisteina (10 mg/kg diluiti in un veicolo come l'olio di ricino polietossilato) mediante sonda gastrica 1 ora prima dell'intervento.
Anestetizzare gli....

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Materials

List of materials used in this article
Name	Company	Catalog Number	Comments
Amyloid beta 1-40	Sigma Aldrich	79793	Keep in -70 °C
Genistein	Sigma Aldrich	446-72-0	keep in -20 °C
anticorpi policolonali di coniglio contro la proteina acida fibrillare gliale	DAKO	Z0334
anticorpi IgG anti-coniglio di suini coniugati con fosfato alcalino	DAKO
Cromogeno permanente liquido	DAKO	K0640
Tampone permanente liquido per substrato rosso	DAKO	K0640
Cremophor EL	Sigma Aldrich	27963	Olio di ricino polietossilato - Passaggio 1.1
LSM 700 Microscopia a scansione laser confocale	Carl Zeiss
Volocity 6.3	Perkin Elmer Inc.,
Analisi delle immagini 2000	Tekno Apparecchio streotassico ottico
	Stoelting
Graph pad Prism 5	Graph pad software Inc.

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