Imaging dei tessuti profondi del cervello di un pesce zebra utilizzando un microscopio a fluorescenza a tre fotoni

Abstract

Fonte: Hontani, Y., et al. Microscopia a fluorescenza a tre fotoni dei tessuti profondi nel cervello intatto di topo e pesce zebra. J. Vis. Exp. (2022)

Questo video mostra la configurazione e l'esecuzione dell'imaging a tre fotoni in un cervello di pesce zebra anestetizzato. Il protocollo consente la visualizzazione dei tessuti profondi di neuroni marcati in fluorescenza, rivelando l'attività neuronale e le strutture in tempo reale per le applicazioni di ricerca nelle neuroscienze.

Protocollo

Tutte le procedure che coinvolgono modelli animali sono state esaminate dal comitato istituzionale locale per la cura degli animali e dal comitato di revisione veterinaria JoVE.

1. Imaging intravitale nel cervello del pesce zebra
   NOTA: Per localizzare correttamente il cervello del pesce sotto la lente dell'obiettivo, viene utilizzata una fotocamera CCD (Charge-Coupled Device) secondaria sullo stesso percorso della luce di eccitazione per l'imaging a campo largo.
   
   1. Imposta il microscopio e calibra la potenza.
   2. Posizionare un obiettivo a basso ingrandimento (in genere 4x) sul microscopio.
   3. Posizionare l....

Risultati

Figura 1: Schermate rappresentative per l'imaging intravitale nei pesci (sezione protocollo 1). (A) Visualizzazione in modalità telecamera del software di acquisizione delle immagini con obiettivo 4x inserito. Le caratter.......

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
5% Povidone-iodio	Amazon	NDC 67818-155-32	Pulizia atopica delle aree chirurgiche
70% Etanolo	Thermo Fisher Scientific	CAS 64-17-5	Pulizia aceptica delle aree chirurgiche
Agarose	Sigma	A4718-256	Preparazione della camera del pesce zebra
Bergamo II	Thorlabs		Microscopio per imaging multifotone
Bupivacaina	Cornell Veterinary Care
GaAsP PMT amplificato	Thorlabs	PMT2100	Rivelatore PMT
Riscaldatore (800 W)	Finnex		Riscaldatore per acquario per acqua di pesce zebra
Kimwipes	Kimtech		Tessuto da laboratorio per la preparazione del pesce zebra
Siringa Nanofil (10 micrometri) con ago da 36 G	WPI	NANOFIL + NF36BV	Siringa e ago per iniezione di bromuro di pancuronio
Pompa peristaltica	Elemental Science	ESI MP2	Pompa dell'acqua per l'installazione del pesce zebra
Tubo in polietilene (D.I. 0,58 mm., D.E. 0,965 mm.)	Elemental Science	MP2 pompa	Tubo che va nella bocca del pesce zebra
SR400	Stanford Research Systems	SR400	Contatore di fotoni
Fotodiodo standard Sensore di potenza a fotodiodo	Thorlabs	S122C	Rivelatore di potenza
Cera da boxe a striscia sottile	Corning Rubber Co., Inc.		Tubo di tenuta in posizione nella camera del pesce zebra
ThorImage	Thorlabs Software di	acquisizione immagini
Tricaina (sale etil-m-amminobenzoato metanosulfonato)	MP	103106	Anestesia ed eutanasia del pesce zebra
Tubo Tygon (D.I. 1/16 in., D.E. 1/8 in.)	Tygon		Tubo per il flusso d'acqua per la preparazione del pesce zebra
VaporGuard	VetEquip	Per il riciclaggio dell'isoflurano
Adesivo per tessuti Vetbond	3M	1469SB	Per incollare la finestra di vetro sul cranio del topo e per incollare il tessuto di laboratorio durante la preparazione del pesce.
XLPLN25XWMP2	Obiettivo dedicato all'eccitazione multifotone	Olympus

) tubo 931401