Tutte le procedure che coinvolgono modelli animali sono state esaminate dal comitato istituzionale locale per la cura degli animali e dal comitato di revisione veterinaria JoVE.
1. Prepara il rat<
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Aumenta l'ossigeno a 1 L/min e imposta l'anestesia con isoflurano al 5%. Assicurarsi che l'anestesia gassosa fluisca verso la camera di induzione controllando tutti i tubi di collegamento e l'orientamento del rubinetto.Metti il ratto nella camera di induzione dell'anestesia gassosa per circa 3 minuti fino a quando il ratto non risponde.Garantire un'adeguata profondità dell'anestesia pizzicando la punta. Non ci dovrebbe essere movimento nel piede o nella gamba dopo il pizzicamento delle dita.Ridurre l'anestesia con isoflurano al 2% per il mantenimento e regolare il rubinetto in modo che l'anestesia fluisca verso la maschera per anestesia.Metti il naso del ratto nella maschera per anestesia e regola il ratto in modo che sia sdraiato su un fianco.Identificare la vena laterale della coda.
NOTA: Le vene laterali della coda si trovano a circa le 10 e le 2, con la parte superiore dorsale della coda a ore 12. Con il ratto sdraiato su un fianco, la vena laterale della coda dovrebbe essere rivolta verso l'alto.Pulire l'area di iniezione con il tampone per la preparazione dell'alcol. Il sito di iniezione si trova a due terzi della lunghezza della coda.2. Inietta il vettore
- Tieni saldamente la coda leggermente sopra l'area di iniezione con un dito direttamente sopra la vena laterale della coda; questo dilerà la vena.
- Con lo smusso rivolto verso l'alto, allineare l'ago con la vena della coda visibile nella stessa direzione.
- Forare la pelle sopra la vena caudale facendo molta attenzione a evitare che l'altra mano tenga la coda e prema sulla vena caudale .
- Rilasciare la pressione dalla vena caudale per consentire il normale flusso sanguigno.
- Spostare l'ago nella vena. Per assicurarsi che l'ago abbia perforato la vena caudale, tirare leggermente indietro lo stantuffo. Se l'ago è nella vena, il sangue scorrerà nell'ago.
- Riposiziona l'ago secondo necessità. Quindi, per stabilizzare l'ago, spostare la mano sopra il sito di iniezione verso il basso e tenere l'estremità della siringa contro la coda.
- Iniettare lentamente il vettore nella coda (circa 20 μL/s).
NOTA: La vena può perdere colore mentre il vettore scorre attraverso di essa. I segni che la soluzione è stata iniettata al di fuori della vena includono blebbing, sbiancamento della pelle o resistenza durante l'iniezione del vettore. Con la pratica, l'esposizione extravascolare può essere ridotta al minimo. - Dopo che il vettore è stato somministrato, rimuovere l'ago dal ratto e premere una garza contro il sito di iniezione per aiutare ad arginare l'emorragia per 30-60 secondi.
3. Pulizia
- Spegnere l'anestesia con isoflurano e l'ossigeno. Monitora il ratto fino a quando non riprende conoscenza, quindi rimettilo nella sua gabbia.