I neuroni adulti, nato del bulbo olfattivo può essere controllato tramite optogenetically Channelrhodopsin2 che esprimono iniezione lentivirali nel flusso migratorio rostrale e fotostimolazione cronica con una miniatura impiantato LED.
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Articolo metodologico
Selettiva trasduzione virale di neuroni olfattivi per adulti nati per cronica In vivo Optogenetic Stimolazione
In questo articolo
Sommario
Abstract
Interneuroni locali sono continuamente rigenerati nel bulbo olfattivo di roditori adulti 1-3. In questo processo, chiamato neurogenesi adulta, le cellule staminali neurali nelle pareti del ventricolo laterale danno luogo a neuroblasti che migrano per diversi millimetri lungo il flusso migratorio rostrale (RMS) per raggiungere e incorporare nel bulbo olfattivo. Per studiare le diverse fasi e l'impatto di adulti nati integrazione dei neuroni preesistenti in circuiti olfattiva, è necessario etichettare in modo selettivo e manipolare l'attività di questa specifica popolazione di neuroni. Il recente sviluppo delle tecnologie optogenetic offre l'opportunità di usare la luce per attivare appunto questo gruppo specifico di neuroni senza intaccare i neuroni circostanti 4,5. Qui vi presentiamo una serie di procedure per viralmente esprimere Channelrhodopsin2 (ChR2)-YFP in una coorte temporalmente ristretto di neuroblasti in RMS prima di raggiungere il bulbo olfattivo e diventare adulto-nato neurons. Inoltre, ci mostrano come impianto e calibrare una miniatura a LED per la stimolazione cronica in vivo di ChR2-esprimere i neuroni.
Protocollo
1. Stereotassica iniezioni
- Il virus usato in questi esperimenti è una replica con deficit di vettori lentivirali basati sul virus HIV per esprimere Channelrhodopsine2-YFP (gialla proteina fluorescente) fusione costruire guidata da un promotore sinapsina 6. Il plasmide è stato generosamente forniti da K. Deisseroth 's di ricerca del gruppo ( http://www.stanford.edu/group/dlab/optogenetics/index.html ). Lentivirus possono essere ottenute da fonti commerciali o prodotti in laboratorio secondo i protocolli stabiliti 7. I titoli vettore media sono stati nell'ordine di....
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Discussione
Strumenti Optogenetic hanno recentemente aumentato il nostro controllo sulle popolazioni di neuroni selettivi, tra cui i neuroni adulti nati nel sistema olfattivo. Qui si descrivono come eseguire una iniezione stereotassica di un vettore lentivirus che esprimono ChR2-YFP in una specifica popolazione di adulti nati neuroni. Con un attento monitoraggio del periodo post-iniezione, siamo in grado di analizzare e manipolare l'attività di una coorte di adulti nati i neuroni con un età relativa omogenea.
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Dichiarazioni
Nessun conflitto di interessi dichiarati.
Ringraziamenti
Questo lavoro è stato sostenuto dalla compagnia di assicurazione sulla vita "Novalis-Taitbout", Ecole des Neurosciences de Paris (PEV), l'Agence Nationale de la Recherche "ANR-09-Neur-004", nella cornice di "NEURON ERA-NET" di 7 ° PQ dalla Commissione Europea, "Fondazione pour la Recherche Medicale", la Fondazione Letten e la Fondazione Pasteur.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Materiale | Azienda | Catalogo N. | |
| Ketamina | Merial | Imalgène 1000 | |
| Xylazina | Bayer Health Care | Rompum 0,2% | |
| Pipetta Puller | Sutter | P-97 | |
| Capillari di vetro (3,5 ") | Drummond scientifico | 3-000-203-G / X | |
| Nanoject II Microinjector | Drummond scientifico | 3-000-204 | |
| Trapano ad alta chirurgia | Strumenti Scienza multa | 18000-17 | |
| Micro Drill acciaio Frese punta 0,7 millimetri di diametro | Strumenti Scienza multa | 19008-07 | |
| CMS LED blu 4,6 W | OSRAM | LBW5SN | |
| Femmina connettore elettrico (2,54 mm) | Fischer Elektronik | BL5.36Z | |
| Regolatore di corrente per LED (max: 1A) | A1W Electronik | HKO-KL50-1000 | |
| Generatore di impulsi | AMPI | Maestro-8 | |
| Misuratore di potenza ottica | Thor Labs | PM100 | |
| Cianoacrilato | Loctite | 454 | |
| Policarbossilato cemento (cemento primo strato) | Septodont | Selfast (# 0068Q) | |
| Metacrilato di cemento (cemento secondo strato) | GC InternationalCorp. | Unifast Trad - liquidi (# 339292) Unifast Trad - Polvere (# 339114) | |
| Carprofene | Pfizer | Rimadyl |
Riferimenti
- Lledo, P. M. Adult neurogenesis and functional plasticity in neuronal circuits. Nat. Rev. Neurosci. 7, 179-193 (2006).
- Alonso, M. Turning astrocytes from the rostral migratory stream into neurons: a role for the olfactory sensory organ.....
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Ristampe e permessi
