Il nostro protocollo dimostra come versare gel proteici più in un momento di riciclaggio Invitrogen Nupage Novex minigel cassette e materiali a basso costo acquistati in un negozio di miglioramento domestico. Questo metodo economico e razionale include un modo per memorizzare i gel a 4 ° C per alcune settimane. Per riutilizzare le cassette di plastica da gel gel disponibili in commercio, laboratori che eseguono gel proteici frequenti possono notevoli risparmi sui costi e aiutare l'ambiente.
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Articolo metodologico
Versando ed esecuzione di un gel proteico riutilizzando Cassettes commerciali
In questo articolo
Sommario
Abstract
La valutazione delle proteine che utilizzano sodio dodecil solfato di elettroforesi su gel di poliacrilammide (SDS-PAGE) L'analisi è una tecnica comunemente usata dai ricercatori Biochimica e Biologia Molecolare 1-4. Per i laboratori che eseguono analisi giornaliere di proteine, il costo di gel di poliacrilammide disponibili in commercio (~ $ 10/gel) può essere considerevole nel tempo. Per ridurre questo costo, alcuni ricercatori preparano i loro gel di poliacrilammide propri. I metodi tradizionali di riversare questi gel tipicamente utilizzano attrezzature specializzate e delle lastre di gel di vetro che possono essere costosi e preclude colata gel molti e la loro memorizzazione per un uso futuro. Inoltre, la movimentazione delle lastre di vetro durante la pulizia o gel versando può portare a rotture accidentali creando un pericolo per la sicurezza, che potrebbe precludere il loro uso in laboratorio le classi di laurea. Il nostro protocollo dimostra come versare gel proteici contemporaneamente dal riciclaggio Invitrogen Nupage Novex cassette minigel, e poco costoso materiali acquistato in un negozio di miglioramento domestico. Questo metodo economico e razionale include un modo per memorizzare i gel a 4 ° C per alcune settimane. Per riutilizzare le cassette di plastica da gel gel disponibili in commercio, laboratori che eseguono gel proteici frequenti possono notevoli risparmi sui costi e aiutare l'ambiente. Inoltre, le cassette di plastica gel sono estremamente resistenti alla rottura, che li rende ideali per le aule di laboratorio di laurea.
Protocollo
1. Preparare le cassette
- Anteriore e posteriore Clean piatti di un usato cassette Invitrogen Nupage Novex minigel, o altre cassette minigel commerciale.
- Preparare circa 1-3 ml di resina epossidica di plastica e mescolare bene secondo le istruzioni del produttore.
- Applicare la resina epossidica al bordo interno della piastra frontale, dove le due piastre a contatto quando la cassetta viene assemblato.
- Inserire un pezzo di carta da filtro o cartone attraverso la fessura inferiore della piastra posteriore durante il montaggio della cassetta per impedire resina in eccesso di sigillare l'apertura. Rimuovere la carta da filtro non a....
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Discussione
Gel elettroforesi delle proteine è un metodo indispensabile per la maggior parte laboratori di biologia molecolare. Minigels commercialmente disponibili forniscono un elevato livello di comfort, ma può essere costoso. Qui vi mostriamo come riutilizzare le cassette minigel da una popolare marca di minigels disponibili in commercio. Questo metodo mantiene la comodità di avere una pronta fonte di gel, ma ad una frazione del costo di minigels disponibili in commercio. Un passaggio chiave in questo procedimento sta applica.......
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Dichiarazioni
Non ci sono conflitti di interesse dichiarati.
Ringraziamenti
Gli autori ringraziano l'Howard Hughes Medical Institute per una scienza UF per l'aggiudicazione Vita AH
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Nome di reagente | Azienda | Numero di catalogo | Comments |
| Invitrogen Nupage Novex minigel Cassette (1,0 mm) | Invitrogen | NC2010 | Disponibile in 2, 5, 10, 12, 15 e 2D pozzetti |
| Epoxy plastica | Loctite | 108771 | |
| Nastro isolante | Scotch | ||
| Pallone da 125 mL lato del braccio | Pyrex | 5360 | |
| 4X Tris-Base resolving gel tampone | 1,5 M Tris-base pH 8,7 | ||
| acrilammide | Fisher Scientific | 01065-500 | |
| Bis-acrilamide | Biomedicals MP, Inc. | 800173 | |
| Acrilammide soluzione 30,8% | 30:0.8 acrilammide: bis-acrilammide in IRG-H 2 O | ||
| 10% APS | Fisher Scientific | BP179-25 | 0,1 g di persolfato di ammonio in 1 ml IRG-H 2 O, preparata immediatamente prima dell'uso |
| TEMED | Arcos Organics | 138450500 | |
| 1-butanolo saturato con tampone 1X gel resolving | 05:02 1-butanolo 1X tampone resolving gel | ||
| 4X Tris-Base tampone stacking gel | 1,5 M Tris-base pH 6,8 | ||
| Gel pettine | Invitrogen | NC3015 | Ben 15, 1,0 mm di spessore |
| Impulse Sealer | TEW Elettrico Impianti di riscaldamento | ||
| Calore Pouch sigillabile | Kapak / Scotchpak | 1 pinta dimensioni (6,5 "x 8") | |
| Gel di accumulo | 1X buffer di impilamento gel con sodio azide 0,1% | ||
| Novex SDS Tris-Glicina tampone campione (2X) | Invitrogen | LC2676 | |
| DTT | FisherBiotech | BP172-5 | |
| 10X Tris-Gylcine tampone di corsa | Invitrogen | LC2675 | 1 litro di brodo 10 volte: 29,0 g di Tris-Base, 144,0 g Glycine, 10,0 g SDS |
| XCell SureLock Mini-Cell | Invitrogen | EI0001 | |
| Gel Knife | Invitrogen | EI9010 | |
| SimplyBlue sicuro Stain | Invitrogen | LC6065 |
Riferimenti
- Laemmli, U. K. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4. Nature. 227, 680-685 (1970).
- Raymond, S., Weintraub, L. Acrylamide gel as a supporting medium for zone electrophoresis. Science. 130, 711-711 (1959).
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Ristampe e permessi
