Abbiamo sintetizzato un analogo romanzo di pancratistatin paragonabile attività anti-cancro come pancratistatin nativo; interessante, il trattamento con tamoxifene combinatoria ha prodotto un miglioramento drastico induzione apoptotica e autophagic da mitocondriale di mira con effetti minimi sui fibroblasti non tumorali. Così, JCTH-4 in combinazione con tamoxifene potrebbe fornire una sicura terapia antitumorale.
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Articolo metodologico
Valorizzazione dei induzione apoptotica e autofagica da un romanzo sintetico C-1 analogico di 7-deoxypancratistatin in adenocarcinoma del seno umano e cellule di neuroblastoma con Tamoxifene
In questo articolo
Sommario
Abstract
Il cancro al seno è uno dei tumori più diffusi tra le donne in Nord America. Molti attuali trattamenti anti-tumorali, incluse le radiazioni ionizzanti, inducono apoptosi attraverso danni al DNA. Sfortunatamente, tali trattamenti non sono selettivi per le cellule tumorali e produrre tossicità simile in cellule normali. Abbiamo riportato l'induzione di apoptosi selettiva in cellule tumorali dal pancratistatin composto naturale (PST). Recentemente, un romanzo PST analogico, un derivato C-1 di 7-acetossimetil deoxypancratistatin (JCTH-4), è stato prodotto mediante sintesi de novo e presenta comparabili selettiva attività inducente l'apoptosi nelle linee cellulari tumorali diverse. Recentemente, autofagia è stato implicato in neoplasie sia come pro-sopravvivenza e pro-morte meccanismi in risposta alla chemioterapia. Tamoxifene (TAM) ha sempre dimostrato l'induzione di pro-sopravvivenza autofagia in numerosi tumori. In questo studio, l'efficacia di JCTH-4 da solo e in combinazione con TAM per indurre la morte cellulare in significatività maternor (MCF7) e neuroblastoma (SH-SY5Y) le cellule è stata valutata. TAM solo indotto l'autofagia, ma la morte delle cellule insignificante, mentre JCTH-4 da sola ha causato significativa induzione di apoptosi con alcuni induzione di autofagia. È interessante notare che il trattamento combinatoria ha prodotto un drastico aumento di induzione di apoptosi e autofagia. Abbiamo monitorato le variazioni morfologiche tempo-dipendenti MCF7 cellule in fase di TAM-indotta autofagia, JCTH-4-indotta l'apoptosi e l'autofagia e morte cellulare accelerata con trattamento combinatoria utilizzando microscopia time-lapse. Abbiamo dimostrato questi composti di indurre apoptosi / autofagia per spese mitocondriale in queste cellule tumorali. È importante sottolineare che questi trattamenti non ha influenzato la sopravvivenza di fibroblasti umani non tumorali. Così, questi risultati indicano che JCTH-4 in combinazione con TAM potrebbe essere usato come un sicuro e molto potente terapia antitumorale contro il cancro al seno e cellule di neuroblastoma.
Protocollo
Introduzione
L'apoptosi, o di tipo I la morte cellulare programmata, è un processo fisiologico che può funzionare estrinsecamente, tramite legame di un ligando per un recettore morte, morte, o intrinsecamente. Il percorso intrinseco di apoptosi è iniziata da stress intracellulare, come il danno al DNA e disfunzione mitocondriale, questo conduce verso la permeabilizzazione dei mitocondri, dissipazione del potenziale di membrana mitocondriale (MMP), rilascio di fattori citotossici dallo spazio intermembrana mitocondriale, e la successiva esecuzione dell'apoptosi 1.
Autofagia è un processo in cui ....
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Discussione
Composti PST e simili hanno dimostrato di avere proprietà anti-cancro 11-15,21. Abbiamo precedentemente riportato PST naturale di destabilizzare selettivamente i mitocondri nelle cellule tumorali, che in tal modo induce apoptosi mediante il rilascio di fattori citotossici 12,14. E 'molto probabile che JCTH-4 agisce attraverso lo stesso meccanismo; JCTH-4 ha causato il collasso MMP in MCF7 come si è visto con colorazione TMRM (Fig. 5a), e una maggiore generazione di ROS nei mito.......
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Dichiarazioni
Non ci sono conflitti di interesse dichiarati.
Ringraziamenti
Questo lavoro è stato sostenuto dai Cavalieri di Colombo capitolo 9671 (Windsor, Ontario), e un CIHR Frederick Banting e Best Charles Canada Graduate Scholarship assegnato a Ma Dennis. Grazie a Hodge Robert ed Elizabeth Fidalgo da Silva per la loro assistenza con la microscopia time-lapse. Grazie a voi Katie Facecchia per la modifica dei time-lapse video microscopia. Vorremmo anche ringraziare Sudipa giugno Chatterjee e Phillip Tremblay per la revisione critica di questo manoscritto. Questo lavoro è dedicato in memoria di Kevin Couvillon che ha perso la sua battaglia contro il cancro nel 2010.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Nome del materiale | Azienda | Numero di catalogo | |
| SH-SY5Y linea cellulare | ATCC | CRL-2266 | |
| Dulbecco Modified Eagles Medio F-12 HAM | Sigma-Aldrich | 51448C | |
| Siero fetale bovino | Gibco BRL | 16000-044 | |
| MCF7 linea cellulare | ATCC | HTB-22 | |
| Mezzo RPMI-1640 | Sigma-Aldrich | R 0883 | |
| A quanto pare umano normale linea cellulare di fibroblasti fetali (NFF) | Coriell Institute for Medical Research | AG04431B | |
| Media Dulbeccòs Modified Eagle, medio alto glucosio | Thermo Scientific | SH30022.01 | |
| Tamoxifene sale | Sigma-Aldrich | T9262 | |
| 35 mm vetro di fondo della cultura piatti | MatTek | P35G-014-C | |
| Leica DMI6000 B microscopio invertito | Leica Microsystems | N / A | |
| Colorante Hoechst 33342 | Molecular Probes | H3570 | |
| Leica DM IRB invertito microscopio a fluorescenza | Leica Microsystems | N / A | |
| Annessina V AlexaFluor-488 | Invitrogen | A13201 | |
| Trypan Blu soluzione | Sigma-Aldrich | T8154-20ML | |
| Emocitometro | Fisher Scientific | 267110 | |
| WST-1 reagente | Roche Applied Science | 11644807001 | |
| Wallac Victor 3 1420 Multilabel contatore | PerkinElmer | 1420-011 | |
| Tetrametilrodamina metilestere (TMRM) | Gibco BRL | T-668 | |
| Glass tessuto grinder | Fisher Scientific | K8885300-0002 | |
| BioRad proteine test | Bio-Rad Laboratories | 500 0001Bottom della Forma | |
| Amplex Red | Invitrogen | A12222 | |
| Perossidasi di rafano (HRP) | Sigma-Aldrich | P8125 | |
| Spectramax Gemini XPS | Molecular Devices | 3126666 | |
| Anti-LC3 anticorpo cresciuto in coniglio | Novus Biologicals | NB100-2220 | |
| Anti-mouse HRP-coniugato anticorpo secondario | Abcam | ab6728 | |
| Anti-coniglio HRP-anticorpo secondario coniugato | Abcam | ab6802 | |
| Chemiluminescenza perossidasi substrato | Sigma-Aldrich | CPS160 | |
| Monodansylcadaverine | Sigma-Aldrich | 30432 |
Riferimenti
- Earnshaw, W. C. Apoptosis. A cellular poison cupboard. Nature. 397, 387-389 (1999).
- Kroemer, G., Mariño, G., Levine, B. Autophagy and the integrated stress response. Mol. Cell. 40, 280-293 (2010).
- Dalby, K. N., Tekedereli, I., Lopez-Berestein, G., Ozpolat, B.
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Ristampe e permessi
