Alcuni ceppi di topi sono in grado di resistere induzione di encefalomielite autoimmune sperimentale (EAE) con proteina basica della mielina. Qui descritto è un protocollo di immunizzazione semplice che inverte la mancanza di risposta e induce malattia paralitica in diversi tipiche macchie resistenti EAE del mouse.
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Articolo metodologico
Superare blocco nel encefalomielite autoimmune sperimentale (EAE) ceppi di topi resistenti dal trasferimento adottivo e uno stimolo antigenico
In questo articolo
Sommario
Abstract
Encefalomielite autoimmune sperimentale (EAE) è una malattia infiammatoria del sistema nervoso centrale (CNS) ed è stato usato come modello animale per lo studio della malattia demielinizzante umano, sclerosi multipla (MS). EAE è caratterizzata da patologica infiltrazione di cellule mononucleari nel sistema nervoso centrale e da manifestazione clinica di malattia paralitica. Simile al MS, EAE è sotto controllo genetico in alcuni ceppi di topi che sono suscettibili di induzione della malattia, mentre altri sono resistenti. In genere, C57BL / 6 (H-2 b) i topi immunizzati con proteina basica della mielina (MBP) non riescono a sviluppare segni di paralisi. Questa mancanza di risposta non è certamente dovuti a difetti di lavorazione dell'antigene o presentazione dell'antigene di MBP, come un protocollo sperimentale descritto qui era stato usato per indurre EAE grave in topi C57BL / 6, nonché altri ceppi resistenti reputato topo. Inoltre, cloni di cellule T encefalitogeniche da C57BL / 6 e topi Balb / c reattivi per MBP stata successocompletamente isolato e propagato.
Il protocollo sperimentale comporta l'uso di un sistema cellulare in cui il trasferimento adottivo MBP-primer (200 pg / topo) C57BL / 6 donatori cellule dei linfonodi sono isolati e coltivati per cinque giorni con l'antigene per espandere il pool di MBP-cellule T specifiche. Al termine del periodo di coltura, 50 milioni di cellule vitali sono trasferite in naive riceventi singenici attraverso la vena della coda. Destinatari topi così trattati normalmente non si sviluppano EAE, riaffermando così il loro status resistenti, e possono rimanere normale a tempo indeterminato. Dieci giorni dopo il trasferimento delle cellule, topi riceventi sono sfidati con adiuvante di Freund completo (CFA)-MBP emulsionato in quattro siti nei fianchi. EAE grave inizia a svilupparsi in questi topi dieci a quattordici giorni dopo la sfida. I risultati hanno mostrato che l'induzione della malattia era antigenica specifica come una sfida con gli antigeni irrilevanti non ha indotto sintomi clinici della malattia. Significativamente, una titolazione della dose di antigene utilizzato persfidare i topi riceventi hanno dimostrato che potrebbe essere il più basso 5 mg / mouse. Inoltre, uno studio cinetico della temporizzazione di stimolazione antigenica mostrato che sfida di indurre la malattia era efficace come già 5 giorni dopo stimolazione antigenica e fintantoché oltre 445 giorni dopo la stimolazione antigenica. Questi dati puntano fortemente verso il coinvolgimento di una "lunga durata" popolazione di cellule T nel mantenimento assenza di reazione. Il coinvolgimento delle cellule T regolatorie (Tregs) in questo sistema non è definito.
Protocollo
1. Preparazione CFA-emulsionato Antigen
- Sciogliere cavia MBP (preparato secondo il metodo di Swanborg1 e conservate in forma liofilizzata a 4 ° C) in tampone fosfato (PBS) ad una concentrazione di 2 mg / mL. Se peptidi sintetizzati MBP (MBP 60-80, SHHAARTTHYGSLPQKSQR) 2 vengono utilizzati, preparare un 2 mg / mL di soluzione. Redigere una quantità appropriata di soluzione antigene (0.1 mL per mouse per essere immunizzati) in una siringa di vetro con luer-lok.
- Disegnare un volume di adiuvante completo di Freund H37Ra (0.1WT%) (CFA, Difco Laboratories) pari alla soluzione di antigene in un'altra siringa di vetro munito Lue....
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Discussione
Studi di EAE nei topi utilizzano spesso le neuroantigens e proteina basica della mielina (MBP), proteine proteolipidica (PLP) o di proteine della mielina degli oligodendrociti (MOG). Studi precedenti in gran parte utilizzato MBP. PLP stimola risposte forti e coerenti dai topi SJL. Più di recente, MOG è la neuroantigen comunemente usato B6, perché i topi sono suscettibili di induzione della malattia con questo antigene. Molti ceppi mirati geni di topo sono su sfondo genetico B6. È interessante notare, B6 topi sono su.......
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Dichiarazioni
Non ci sono informazioni finanziarie.
Ringraziamenti
Sostenuto in parte da sovvenzioni da parte del National Institutes of Health (R01 NS37253 e N01 NS055167) e la National Multiple Sclerosis Society (RG 3288-A6).
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Nome del reattivo | Azienda | Numero di catalogo | Comments |
| Cavia midollo spinale | Rockland Immuno-chimici, Inc. Gilbertsville, PA 19525 www.rockland-inc.com | GP-T065 | congelati |
| Adiuvante di Freund completo H37Ra | Difco Laboratories Detroit, MI | 231131 | |
| Multifit intercambiabili in grado di siringa | BD www.bd.com / us | 512133 | |
| RPMI 1640 | MediatechInc. Manassas, VA www.cellgro.com | 10-040-CM | |
| OVA | Sigma-Aldrich www.sigmaaldrich.com | A5503 | |
| Mice | Jackson Laboratory Bar Harbor, Maine | B6 topi: 0000664 |
Riferimenti
- Swanborg, R. H. Experimental allergic encephalomyelitis. Methods in Enzymology. Sabato, G. D. 162, Academic Press. New York, NY. 413-421 (1988).
- Shaw, M. K., Kim, C., Hao, H. W., Chen, F., Tse, H. Y. Induction of myelin basic pro....
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Ristampe e permessi
