Isolamento di cellule T CD4 + da Linfonodi mouse utilizzando Miltenyi Purificazione MACS

Sommario

Isolamento dei linfociti utilizzando il kit di Miltenyi MAC è un modo affidabile per purificare le cellule da tutta omogenati di tessuto linfoide. Cellule purificate utilizzando il sistema Miltenyi sono tipicamente ≥ 96% puro. Qui, le misure prese per isolare cellule T CD4 +, uno dei tanti kit offerto da Miltenyi.

Abstract

L'isolamento di cellule dalla fonte primaria è un passo necessario in molti protocolli più complessi. Miltenyi offre kit per isolare cellule di diversi organismi compresi gli esseri umani, primati non umani, ratto e, come abbiamo descritto qui, topi. Perla magnetica a base di separazione cellulare permette a ciascuna selezione positiva (o deplezione delle cellule), così come selezione negativa. In questo studio dimostriamo selezione negativa dei CD4 ve intatta o na + cellule T helper. Utilizzando questo protocollo standard che di solito purificare le cellule CD4 che sono ≥ 96% puro + / CD3 +. Questo protocollo è utilizzato in combinazione con il protocollo di dissezione e 2-Photon Imaging dei linfonodi periferici in topi pubblicato nel numero 7 di Giove, per la purificazione delle cellule T e altri tipi di cellule per trasferire adoptively per scopi di imaging. Anche se non ha dimostrato l'analisi FACS in questo video protocollo, si consiglia vivamente di verificare la purezza complessivo di cellule isolate utilizzando gli anticorpi adeguati tramite FACS. Inoltre, dimostrare la non-sterili metodo di isolamento delle cellule T. Se le cellule sterili sono necessari per il vostro particolare end-user, essere sicuri di fare tutte le procedure dimostrato nel cofano coltura tissutale riferiti alle seguenti condizioni sterili. Grazie per la visione e buona fortuna con i vostri esperimenti!

Protocollo

Si prega di leggere e seguire il protocollo incluso nel kit Miltenyi oppure online su http://www.miltenyibiotec.com/ .

Discussione

Isolamento di cellule dalla fonte primaria è un passo necessario in molti protocolli più complessi. Miltenyi offre kit per isolare cellule di diversi organismi compresi gli esseri umani, primati non umani, ratto e, come abbiamo descritto qui, topi. Perla magnetica a base di separazione cellulare permette a ciascuna selezione positiva (o deplezione delle cellule), così come selezione negativa. In questo studio dimostriamo selezione negativa dei CD4 ve intatta o na + cellule T helper. Utilizzando questo protocollo standard che di solito purif...

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Reagente	tampone MACS	Nessuno	Nessuno	Preparare come descritto da Miltenyi.
Kit di isolamento delle cellule T CD4+: Reagente di isolamento intatto		Miltenyi Biotec	130-090-860	Da utilizzare con il sistema Miltenyi.
Reagente			sterile salino tamponato con fosfato (PBS)	Da utilizzare nella preparazione del tampone MACS.
Corning 35mm Piatto di coltura non trattato con TC Altro		Corning	430588	utilizzato nella preparazione di una sospensione a singola cellula.
Strumento per filtrare le cellule da 70 micron		BD Biosciences	352350	Utilizzato nella preparazione di una sospensione a singola cellula.
Strumento per siringhe da 6 ml		Tyco Healthcare, Covidien	8881516051	Utilizzato nella preparazione di una sospensione a singola cellula.
10x Dulbecco' s Soluzione salina tamponata con fosfato (DPBS)	Reagente	Invitrogen	14200-075	Per l'uso nella lisi dei globuli rossi.
Reagente acqua sterile		Sigma-Aldrich	W4502	Per l'uso nella lisi dei globuli rossi.