Isolamento dei linfociti utilizzando il kit di Miltenyi MAC è un modo affidabile per purificare le cellule da tutta omogenati di tessuto linfoide. Cellule purificate utilizzando il sistema Miltenyi sono tipicamente ≥ 96% puro. Qui, le misure prese per isolare cellule T CD4 +, uno dei tanti kit offerto da Miltenyi.
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Articolo metodologico
Isolamento di cellule T CD4 + da Linfonodi mouse utilizzando Miltenyi Purificazione MACS
In questo articolo
Sommario
Abstract
L'isolamento di cellule dalla fonte primaria è un passo necessario in molti protocolli più complessi. Miltenyi offre kit per isolare cellule di diversi organismi compresi gli esseri umani, primati non umani, ratto e, come abbiamo descritto qui, topi. Perla magnetica a base di separazione cellulare permette a ciascuna selezione positiva (o deplezione delle cellule), così come selezione negativa. In questo studio dimostriamo selezione negativa dei CD4 ve intatta o na + cellule T helper. Utilizzando questo protocollo standard che di solito purificare le cellule CD4 che sono ≥ 96% puro + / CD3 +. Questo protocollo è utilizzato in combinazione con il protocollo di dissezione e 2-Photon Imaging dei linfonodi periferici in topi pubblicato nel numero 7 di Giove, per la purificazione delle cellule T e altri tipi di cellule per trasferire adoptively per scopi di imaging. Anche se non ha dimostrato l'analisi FACS in questo video protocollo, si consiglia vivamente di verificare la purezza complessivo di cellule isolate utilizzando gli anticorpi adeguati tramite FACS. Inoltre, dimostrare la non-sterili metodo di isolamento delle cellule T. Se le cellule sterili sono necessari per il vostro particolare end-user, essere sicuri di fare tutte le procedure dimostrato nel cofano coltura tissutale riferiti alle seguenti condizioni sterili. Grazie per la visione e buona fortuna con i vostri esperimenti!
Protocollo
Si prega di leggere e seguire il protocollo incluso nel kit Miltenyi oppure online su http://www.miltenyibiotec.com/ .
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Discussione
Isolamento di cellule dalla fonte primaria è un passo necessario in molti protocolli più complessi. Miltenyi offre kit per isolare cellule di diversi organismi compresi gli esseri umani, primati non umani, ratto e, come abbiamo descritto qui, topi. Perla magnetica a base di separazione cellulare permette a ciascuna selezione positiva (o deplezione delle cellule), così come selezione negativa. In questo studio dimostriamo selezione negativa dei CD4 ve intatta o na + cellule T helper. Utilizzando questo protocollo standard che di solito purif.......
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno nulla da dichiarare.
Ringraziamenti
Ringraziamo Rebecca Paquett per la preparazione del tampone MACS.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti | |
|---|---|---|---|---|
| Tampone MACS | Reagente | None | None | Preparare come descritto da Miltenyi. |
| Kit per l'isolamento di cellule T CD4+: Isolamento Untouched | Reagente | Miltenyi Biotec | 130-090-860 | Da utilizzare con il sistema Miltenyi. |
| Soluzione salina fosfato sterile (PBS) | Reagente | Da utilizzare nella preparazione del tampone MACS. | ||
| Piastra per colture da 35 mm Corning non trattata per adesione cellulare (TC-Treated) | Altro | Corning | 430588 | Utilizzata nella preparazione di una sospensione di singole cellule. |
| Filtro cellulare da 70 micron | Strumento | BD Biosciences | 352350 | Utilizzato nella preparazione di una sospensione di singole cellule. |
| Siringa da 6 mL | Strumento | Tyco Healthcare, Covidien | 8881516051 | Utilizzata nella preparazione di una sospensione di singole cellule. |
| Phosphate Buffered Saline (DPBS) 10x di Dulbecco’s | Reagente | Invitrogen | 14200-075 | Da utilizzare nella lisi dei globuli rossi. |
| Acqua sterile | Reagente | Sigma-Aldrich | W4502 | Da utilizzare nella lisi dei globuli rossi. |
Riferimenti
- Miller, M. J., Hejazi, A. S., Wei, S. H., Cahalan, M. D., Parker, I. T cell repertoire scanning is promoted by dynamic dendritic cell behavior and random T cell motility in the lymph node. Proc Natl Acad Sci U S A. 101, 998-1003 (2004).
- Matheu, M. P., Deane, J. A., Parker, I., Fruman, D. A., Cahalan, M. D.
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Ristampe e permessi
