Questo articolo descrive la somministrazione di Lux-tagged Batteri ai topi e successive In vivo Analisi usando l'imaging bioluminescenza IVIS.
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Articolo metodologico
Bioluminescent Imaging batterica
* These authors contributed equally
In questo articolo
Sommario
Abstract
Questo video descrive l'uso del corpo intero bioluminesce imaging (BLI) per lo studio di traffico batterica in topi vivi, con un'enfasi sull'uso di batteri in terapia genica e cellulare per il cancro. I batteri presenti una classe interessante di vettore per la terapia del cancro, in possesso di una naturale capacità di crescere preferenzialmente all'interno del tumore dopo somministrazione sistemica. Batteri ingegnerizzati per esprimere il gene lux cassetta rilevamento permesso BLI dei batteri e contemporaneamente siti tumorali. La posizione e livelli di batteri all'interno del tumore nel tempo può essere facilmente esaminato, visualizzati in due o tre dimensioni. Il metodo è applicabile ad una vasta gamma di specie batteriche e tipi xenograft tumorali. In questo articolo si descrive il protocollo per l'analisi dei batteri bioluminescenti in topi portatori di tumore sottocutaneo. Visualizzazione dei batteri commensali del tratto gastrointestinale (GIT) di BLI è anche descritto. Questo potente, ed economico, imaging in tempo reale strategia di rappresentantits un metodo ideale per lo studio dei batteri in vivo nel contesto della ricerca del cancro, in particolare per la terapia genica e le malattie infettive. Questo video illustra la procedura per lo studio lux-tag E. coli in topi vivi, che dimostrano la lettura spaziale e temporale BLI realizzabile utilizzando con il sistema IVIS.
Protocollo
1. Induzione del tumore
- Per l'induzione del tumore di routine, la dose tumorigenica minimo di cellule in sospensione in 200 pl di mezzo privo di siero di coltura è stato iniettato per via sottocutanea (sc) nel fianco di infezione da 6-8 settimane vecchie femmine Balb / C o topi atimici MF1-nu/nu n = 6 (Harlan, Oxfordshire, UK) (1 x 10 6 cellule 4T1) con un ago da 21 gauge siringa. La vitalità delle cellule utilizzate per l'inoculo era maggiore del 95%, come determinato mediante conta visiva utilizzando un emocitometro e Trypan Blue Dye Exclusion (Gibco).
- In seguito all'istituzione del tumore, i tumori è stato permesso di cr....
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Discussione
Nel contesto della terapia genica, l'uso di agenti biologici per la consegna dei geni terapeutici per pazienti ha mostrato una grande promessa 3-5. Come virus, le proprietà biologiche innate di batteri consentirà una consegna efficiente DNA di cellule o tessuti, in particolare nel contesto di cancro. E 'stato dimostrato che i batteri sono naturalmente capaci di homing per tumori quando somministrati per via sistemica con conseguente livelli elevati di replica locale, sia esterni (non invasivi specie) .......
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Dichiarazioni
Nessun conflitto di interessi dichiarati.
Ringraziamenti
Gli autori desiderano ringraziare il sostegno necessario per questo manoscritto della Commissione europea Settimo programma quadro (PIOF-GA-2009-255466) e l'Irish Health Research Board (HRA_POR/2010/138). Lux-tag E. coli è stato un gentile dono del Dr. Cormac Gahan, University College Cork.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Nome del reagente | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
| Linea di cellule 4T1 | ATCC | CRL-2539 | Singenici carcinoma mammario modello derivato da una spontanee BALB / c tumore mammario |
| DMEM | Sigma-Aldrich | D6429 | Medio Dulbecco Modified Eagle |
| PBS | Sigma-Aldrich | D8537 | Soluzione tampone fosfato |
| Xenogen IVIS | Caliper Life Sciences | IVIS 100 per immagini 2D; spettro IVIS per il 3D. | |
| Luria Broth Miller (LB) | Sigma-Aldrich | L2542 | Terreno di coltura per E. coli |
| Eritromicina | Sigma-Aldrich | E5389 | Antibiotico |
| Streptomicina | Sigma-Aldrich | S9137 | Antibiotico |
| MF1nu/nu topi | Harlan (UK) | 069 (nu) / 070 (nu / +) | HSD: nudi atimici-Foxn1nu |
| Topi BALB / c | Harlan (UK) | 066 | Aplotipo: H-2 d |
| Ago gavage | Vet-Tech Solutions (UK) | DE009 | 22G x 38mm dritto ago gavage |
| Siringa per iniezione endovenosa | BD Biosciences | 309.309-1 ml | Siringa da insulina con 28 G x ½ pollici micro-ago sottile IV. |
| Siringa per l'inoculo del tumore | Braun | 9161376V | Omnifix 26 x G ½ ago pollici |
Riferimenti
- Cronin, M., et al. High resolution in vivo bioluminescent imaging for the study of bacterial tumour targeting. PLoS One. 7, e30940(2012).
- Kuo, C., Coquoz, O., Troy, T. L., Xu, H., Rice, B. W. Three-dimensional reconstructio....
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Ristampe e permessi
