Isolamento dei linfociti da mouse mucosa del tratto genitale

Sommario

Un modo efficace per isolare i linfociti di topo tratto genitale è descritto. Questo metodo si avvale di digestione enzimatica e la separazione gradiente Percoll per consentire l'isolamento efficiente. Questa tecnica è anche adattabile a per l'uso in altre specie

Abstract

Superfici mucose, anche nel tratto gastrointestinale, urogenitale e respiratorio, fornire portali di ingresso per i patogeni, come virus e batteri ^1. Mucose sono anche siti induttivi nell'ospite per generare immunità contro patogeni, come i cerotti Peyers nel tratto intestinale e nasale associata tessuto linforeticolare nel tratto respiratorio. Questa caratteristica unica porta immunità mucosale come un giocatore fondamentale del sistema difesa ospite. Molti studi si sono concentrati sui siti della mucosa gastrointestinale e respiratorio. Tuttavia, vi è stata piccola indagine riproduttivi siti mucosali. La mucosa del tratto genitale è il sito di infezione primaria per le malattie sessualmente trasmissibili (MST), comprese le infezioni batteriche e virali. Malattie a trasmissione sessuale sono una delle sfide più critiche per la salute di fronte al mondo di oggi. Centri per il Controllo e la Prevenzione stima che ci sono 19 milioni di nuovi infetti ogni anno negli Stati Uniti. STDs costato il sistema sanitario degli Stati Uniti 17 miliardi dollari ogni anno ^2, e gli individui dei costi ancora di più in immediate conseguenze per la salute e per tutta la vita. Per far fronte a questa sfida, una maggiore comprensione di riproduzione immunità mucosale è necessario e isolare i linfociti è una componente essenziale di questi studi. Qui, vi presentiamo un metodo per isolare in modo riproducibile da linfociti murini vie genitali femminili per gli studi immunologici che possono essere modificati per adattarsi ad altre specie. Il metodo descritto di seguito è basato su un mouse.

Protocollo

1. Rimozione del tratto genitale

1. Eutanasia il mouse secondo le linee guida approvate. Fai incisione bassa linea mediana e ritrarre la pelle.
2. Isolare e rimuovere tutto tratto genitale, da ovidotto all'apertura vaginale.
3. Aprire l'intero tratto longitudinale con le forbici.
4. Tagliare il tratto genitale con belle forbici chirurgiche in pezzi sottili (circa <1 mm) in una capsula di Petri con RPMI-10/EDTA completa (vedere la formula di seguito) e mescolare il tessuto in 125 ml matraccio a temperatura ambiente su un agitatore magnetico fissato per 15 min. Questa procedura viene ripetuta due volte e poi il surnatante, che conti....

Discussione

In questo protocollo, si mostra come preparare i linfociti da vie genitali del mouse ed è facilmente padronanza. Il punto più critico di questo processo è di mantenere la vitalità cellulare, mantenendo le cellule in ghiaccio. La quantità di cellule da questo metodo dipende dalla tecnica, manipolazione abilità, lo stato infettivo del mouse (ingenua o giorni dopo l'infezione), il patogeno (batterica, virale, fungina) e la sezione del tratto riproduttivo murino esaminati (ovidotto, utero, segmento vaginale o l'inte.......

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Nome	Azienda	Numero di catalogo
Collagenasi	Sigma Life Sciences	C2139-1G
Percoll	GE Healthcare Bio-Scienze	17-0891-01
RPMI1640	Gibco da Life Technologies	11875