Probe-based Endomicroscopy laser confocale del tratto urinario: La Tecnica

Sommario

Sonda basata endomicroscopy laser confocale consente in tempo reale la microscopia del tratto urinario umano durante cistoscopia, fornendo dinamico, imaging intravitale di stati patologici come il cancro della vescica con risoluzione cellulare. Endomicroscopy può aumentare l'accuratezza diagnostica di livello luce bianca endoscopia e fornire orientamenti immagine intraoperatoria per migliorare la resezione chirurgica.

Abstract

Probe-based laser confocale endomicroscopy (CLE) è una tecnologia emergente di imaging ottico che permette in tempo reale in microscopia in vivo di superfici mucose durante il normale endoscopia. Con applicazioni attualmente nelle vie respiratorie e gastrointestinali ^{1, 2-6} CLE è stato analizzato nel tratto urinario per la diagnosi del cancro della vescica. ^7-10 morfologia cellulare e microarchitettura del tessuto può essere risolto con risoluzione scala micron in tempo reale, oltre a l'imaging dinamico del sistema vascolare normale e patologico. ⁷

La sonda basata CLE sistema (Cellvizio, Mauna Kea Technologies, Francia) costituita da una sonda a fibre ottiche di imaging riutilizzabile accoppiato ad un'unità di scansione laser 488 nm. La sonda di imaging viene inserito nei canali di lavoro standard, endoscopi flessibili e rigidi. Un endoscopio basato CLE sistema (Optiscan, Australia), in cui il functionalit endomicroscopy confocaley è integrato sulla endoscopio, è utilizzato anche nel tratto gastrointestinale. Data la portata diametro più grande, tuttavia, applicazione nel tratto urinario è attualmente limitato all'uso ex vivo. ¹¹ acquisizione immagine confocale viene fatto attraverso il contatto diretto della sonda imaging con il tessuto bersaglio e registrata come sequenze video. Come nel tratto gastrointestinale, endomicroscopy del tratto urinario richiede un exogenenous contrasto agente più comunemente fluoresceina, che può essere somministrato per via endovenosa o per via endovescicale. Somministrazione endovescicale è un metodo consolidato per introdurre agenti farmacologici localmente con minima tossicità sistemica che è unico per il tratto urinario. Fluoresceina rapidamente le macchie della matrice extracellulare e ha un profilo di sicurezza. Imaging ¹² sonde di diversi diametri garantire la compatibilità con endoscopi di calibro diversi. Fino ad oggi, 1,4 e 2,6 millimetri sonde sono state valutate con il flessibile e ricistoscopia gid ^10. recente disponibilità di un <1 mm di imaging sonda ¹³ si apre la possibilità di CLE nel tratto urinario superiore durante ureteroscopia. Cistoscopia a fluorescenza (cioè diagnosi fotodinamica) e l'imaging a banda stretta sono ulteriori endoscopio a base di modalità di imaging ottico ¹⁴ che possono essere combinati con CLE per raggiungere l'imaging multimodale del tratto urinario. In futuro, CLE può essere accoppiato con mezzi di contrasto molecolari come peptidi contrassegnati in modo fluorescente ¹⁵ e anticorpi per l'imaging endoscopico di processi di malattia con specificità molecolare.

Protocollo

1. Preparazione del paziente

1. Il consenso del paziente in programma per la cistoscopia diagnostica e altre procedure endourologiche come resezione transuretrale del tumore della vescica (TURBT) per CLE. Includere nella consenso una descrizione dell'uso di fluoresceina intravescicale e / o endovenosa come agente di contrasto. Informarsi storia della reazione di ipersensibilità ad fluoresceina.
2. Paziente viene posizionato per cistoscopia (tipicamente in posizione litotomica) e preparato in modo sterile.
3. Procedere con lo standard cistoscopia a luce bianca (WLC) con un cistoscopio rigido o flessibile attraverso l'uretra.
4. Indagine tutte le regioni della vescica in luce bianca (Figura 1) e annotare le regioni di interesse per le indagini CLE.
5. Oltre al WLC, la vescica può essere ripreso con altre modalità di imaging ottico comprendente macroscopici cistoscopia a fluorescenza (Figura 2A) o imaging banda stretta (Figura 2B) per identify ulteriori aree di sospetto seguita da caratterizzazione con CLE.
6. Utilizzare un elettrodo di cauterizzazione o loop resezione per inserire un segno piccolo cauterio adiacenti alle regioni di interesse, che saranno entrambi impressi e biopsia per la conferma patologica. Il marchio cauterizzazione facilita ri-localizzazione per la successiva CLE imaging e biopsia.

2. Di contrasto

1. Instillazione intravescicale di mezzo di contrasto
   1. Preparare diluendo clinica sodio fluoresceina grade 10% in soluzione salina normale (0,9% NaCl) alla concentrazione desiderata. Per esempio, preparare 400 ml di 0,1% fluorescina diluendo 4 ml di 10% fluoresceina in 396 ml di soluzione salina normale.
   2. Inserire un catetere sterile in vescica urinaria e infondere agente di contrasto diluito per gravità utilizzando un catetere da 60 ml-siringa.
   3. Fissare il catetere urinario per contenere l'agente di contrasto interiore per 5 min.
   4. Scolare agente di contrasto di vescica. Usa la 60 catheter-siringa per lavare contrasto residua dalla vescica con soluzione fisiologica, circa 240-300 ml.
   5. Procedere alla CLE imaging.
2. L'iniezione endovenosa di fluoresceina
   1. Disegna 1,0 ml di fluoresceina nella siringa. Collegare la siringa per iniettare l'accesso per via endovenosa e 0,5-1,0 ml di fluorescina per via endovenosa in bolo. Lavare linea con soluzione fisiologica. Questo viene fatto tipicamente dal team di anestesia in sala operatoria.
   2. Procedere alla CLE imaging.

3. CLE Imaging

1. Rimuovere il sterilizzato CLE immagini della sonda (Cellvizio) dalla confezione e collegarlo all'unità di scansione laser (Mauna Kea Technologies, Parigi, Francia)
2. Riscaldare e calibrare la sonda immagini seguendo le istruzioni del produttore.
3. Reinserire il cistoscopio o resettoscopio nella vescica. Utilizzare uno 0 lente gradi con il cistoscopio rigido.
4. Far avanzare il CLE immagini della sonda lungo il working canale del cistoscopio con la punta appena oltre il cistoscopio.
5. In luce bianca, individuare le regioni precedentemente contrassegnati di interesse. Utilizzare ulteriori irrigazione normale soluzione salina, se necessario per la visualizzazione della mucosa e mantenere moderata distensione della vescica.
6. Manipolare CLE immagini della sonda con la mano dell'operatore per contatto diretto en face delle regioni di interesse. Per sezionamento ottico delle regioni di interesse, delicatamente aumentare e diminuire la pressione alla sonda di imaging restando a contatto diretto.
   1. Per raggiungere i tumori situati nella vescica anteriore, uno standard Albarran ponte può facilitare deflessione della sonda di imaging per il contatto diretto con la regione di interesse (Figura 2C).
7. Regioni comuni di interesse tumore papillare, non papillare del tumore, la transizione tra mucosa normale e tumore, e chiazze eritematose, che possono essere esposte utilizzando via endovesico o la somministrazione per via endovenosa di fluoresceina. Fluoresceina endovenosa è necessaria per l'imaging del letto resezione, uretra prostatica e uretra peniena.
8. Mentre la sonda esegue la scansione di immagini regione di interesse, di registrare le immagini per le analisi future. Nota generale morfologia cellulare, confine, l'organizzazione, e la presenza di neo-angiogenesi.
9. Al termine dell'imaging, rimuovere CLE immagini sonda dal canale di lavoro.
10. Se lo si desidera, ottenere freddo tazza biopsie dalle regioni corrispondenti di interesse che sono stati analizzati da CLE. Utilizzare marcature cauterio come punti di riferimento per la co-registrazione delle aree sotto forma di immagini che vengono sottoposti a biopsia.
11. Completa TURBT per routine. Nei pazienti che hanno ricevuto per via endovenosa di fluoresceina, considerare l'utilizzo di resettoscopi flusso continuo per migliorare la visualizzazione durante la resezione, come fluoresceina viene escreto dal rene in vescica di circa 5 minuti dopo la somministrazione per via endovenosa.
12. Recupera le registrazioni di immagine salvati da confocale processore e conduct analisi dell'immagine.

Risultati

CLE immagini sono salvate come file di sequenze di video in scala di grigi a 12 fotogrammi al secondo. L'interpretazione dell'immagine avviene in tempo reale e possono essere utilizzati per influenzare il processo decisionale clinico in un protocollo sperimentale. Analisi offline, che include la revisione della sequenza video, un'ulteriore elaborazione delle immagini come mosaicatura, ⁷ e confronto con standard di patologia, è importante durante la fase di apprendimento associata con la tecnologia. Figure 1B ...

Discussione

Raggiungere e mantenere solidi contatti en face tra la sonda di imaging e la mucosa della vescica è il passo più importante per acquisire una qualità ottimale dell'immagine. C'è approssimativamente 3-5 apprendimento paziente di sviluppare l'abilità di manipolare la sonda imaging e tenere la sonda costante durante l'acquisizione dell'immagine. Inoltre, poiché questo procedimento è condotto in vivo, i movimenti del paziente (cioè respiratoria) e pulsazioni vascolari possono i...

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Nome del reagente	Azienda	Numero di catalogo	Commenti (opzionale)
Cellvizio Serie 100	Mauna Kea Technologies	Serie 100	Include processore confocale e LSU: F400-v2 a 488 nm
Cellvizio confocale Miniprobe	Mauna Kea Technologies	Gastroflex UHD
AK-FLUOR 10%	Akorn, Inc.	NDC 17478-253-10