Vi presentiamo un metodo per creare un assottigliata-teschio finestra corticale (TSCW) in un modello di topo per In vivo Ottobre immagini della corteccia cerebrale.
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Articolo metodologico
Diluito-cranio Tecnica finestra corticale per
In questo articolo
Sommario
Abstract
Tomografia a coerenza ottica (OCT) è una tecnica di imaging biomedico ad alta risoluzione spazio-temporale. Con il suo approccio mini-invasivo ottobre è stato ampiamente utilizzato in oftalmologia, dermatologia, gastroenterologia e 1-3. Utilizzando una finestra assottigliata cranio-corticale (TSCW), ci avvaliamo di spectral-domain OCT (SD-OCT) modalità come strumento per l'immagine della corteccia in vivo. Comunemente, un aperto-cranio è stato utilizzato per neuro-imaging in quanto fornisce una maggiore versatilità, tuttavia, un approccio TSCW è meno invasiva ed è un mezzo efficace per l'imaging lungo termine in studi neuropatologia. Qui, presentiamo un metodo per creare un TSCW in un modello di topo per l'imaging in vivo ottobre della corteccia cerebrale.
Introduzione
Dalla sua introduzione nei primi anni del 1990, ottobre è stato ampiamente utilizzato per l'imaging biologico della struttura dei tessuti e la funzione 2. Ottobre genera immagini in sezione trasversale misurando il tempo di ritardo dell'eco di 4 luce riflessa mediante l'attuazione di bassa coerenza con sorgente di luce a fibre ottiche 2,4 interferometro di Michelson. SD-OCT, noto anche come dominio di Fourier ottobre (FD-OCT), è stato introdotto nel 1995 5 e offre una modalità di imaging superiore rispetto alla tradizionale dominio del tempo OCT (TD-OCT). In SD-ottobre, il braccio di riferimento viene mantenuto ....
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Protocollo
1. Preparazione chirurgica
- Femmina CD 1 topi di età compresa tra 6-8 settimane sono state utilizzate nei nostri esperimenti.
- Anestetizzare il mouse con una iniezione intraperitoneale di una combinazione di chetamina e xilazina (80 mg / kg ketamine/10 mg / kg xilazina). Posizionare il mouse su un tappetino omeotermi per garantire una temperatura ottimale del corpo a ~ 37 ° C. Monitorare costantemente il livello di anestesia testando riflessi dell'animale (ad esempio, pizzicando piedi con una pinza smussati) e iniettare più l'anestesia in caso di necessità.
- Lubrificare entrambi gli occhi con un unguento lacrima artificial....
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Risultati
Dopo aver creato una finestra assottigliata sulla corteccia cerebrale vascolarizzazione dovrebbe essere ora evidenziare visivamente (Figura 1) e consentirà una profondità di imaging profondo (fino a 1 mm). La corteccia destra viene diluito a circa 55 micron, rispetto ad un teschio normale misurato a 140 micron (Figura 1) e fornisce maggiore chiarezza ottica. Ulteriori diradamento a 10-15 micron è possibile 11 Non occorre tuttavia che l'uso di vetrini in vetro e piastre cr.......
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Discussione
Imaging con OCT e assottigliato-teschio è un romanzo neuro-imaging tecnica che è solo stato recentemente studiato 15, 16. Nei nostri esperimenti, abbiamo dimostrato la fattibilità di SD-OCT immagini attraverso un TSCW in un modello di topo in vivo. Dai risultati ottenuti, il cranio è assottigliata a circa 55 micron e la profondità di penetrazione è ottenuta a circa 1 mm con risoluzione di immagine di 8 um e 20 um in direzione assiale e laterale, rispettivamente. Nel profilo di intensità di segnale, O.......
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Dichiarazioni
Nessun conflitto di interessi dichiarati.
Ringraziamenti
Questo lavoro è stato sostenuto dalla prova UC Discovery di concessione Concept e dal NIH (R00 EB007241). Gli autori desiderano inoltre ringraziare Jacqueline Hubbard per la sua assistenza in questo esperimento.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Materiale | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
| Ketamina | Phoenix Pharmaceuticals | 57319-542-02 | |
| Xylazina | Akorn, Inc. | 139-236 | |
| Artificial Tears Unguento | Rugby | 0536-6550-91 | |
| Nair | Church & Dwight Co., Inc. | 4010130 | |
| Alcool sterile Prep Pad | Kendall Healthcare | 6818 | |
| Cotone Tipped Applicatori | FISHERBRAND | 23-400-115 | |
| Betadine Soluzione Swabstick | Purdue Prodotti | 67618-153-01 | |
| Soluzione salina, 0,9% | Phoenix Pharmaceuticals | 57319-555-08 | |
| Stereotassica Telaio | Stoelting | ||
| Trapano a mano ad alta velocità chirurgica | Foredom | 38.000 rpm | |
| Carbide rotonda Bur | Stoelting | 0,75 millimetri | |
| Dura-verdi Pietre | Shofu | Shank: HP Forma: BA1 | |
| CompoMaster grossa & CompoMaster Lucidatore | Shofu | Forma: Mini-Pt. | |
| SpaceDrapes | Braintree Scientific, Inc. |
Riferimenti
- Bizheva, K., Unterhuber, A., Hermann, B., Povazay, B., Sattmann, H., Drexler, W. Imaging ex vivo and in vitro brain morphology in animal models with ultrahigh resolution optical coherence tomography. Journal of Biomedical Optics. 9, 719-724 (2004).
- Fujimoto, J. G.
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Ristampe e permessi
