Misurazione della tattile Allodinia in un modello murino di prostatite batterica

Sommario

L'infezione della prostata può essere un fattore che contribuisce a mediare dolore pelvico in prostatite cronica. Descriviamo la procedura per la preparazione di standard inoculo batterico, l'instillazione di batteri nell'uretra di topi maschi e la metodologia per la misurazione allodinia tattile nei topi nel corso del tempo.

Abstract

Uropatogeni Escherichia coli (UPEC) sono agenti patogeni che svolgono un ruolo importante nelle infezioni delle vie urinarie e prostatite batterica ^1. Abbiamo recentemente dimostrato che UPEC hanno un ruolo importante nell'avvio di dolore pelvico cronico ^2, una caratteristica di prostatite cronica / sindrome dolorosa pelvica cronica (CP / CPPS) ^3,4. L'infezione della prostata da parte UPEC clinicamente rilevante in grado di avviare e definire il dolore cronico attraverso meccanismi che possono comportare danni ai tessuti e l'avvio di meccanismi di autoimmunità ^5.

Una sfida per comprendere la patogenesi della UPEC nella prostata è relativa inaccessibilità della prostata alla manipolazione. Abbiamo utilizzato un metodo precedentemente descritto infezione intrauretrale ⁶ per fornire un ceppo clinico di UPEC in topi maschi stabilendo, quindi un'infezione ascendente della prostata. Qui, descriviamo i nostri protocolli per uniformare le bacterial inoculo ⁷ nonché la procedura per la cateterizzazione anestetizzati topi maschi per instillazione di batteri.

CP / CPPS è principalmente caratterizzata dalla presenza di allodinia tattile ^4. Test comportamento era basato sul concetto di iperalgesia cutanea risultante da cui ^8-10 dolore viscerale. Un focus irritabile nei tessuti viscerali riduce la soglia del dolore cutaneo che consentano una risposta esagerata al normalmente non dolorosi stimoli (allodinia). Applicazione della forza normale al risultato pelle in risposte anomale che tendono ad aumentare con l'intensità del dolore viscerale sottostante. Descriviamo metodologia in NOD / ShiLtJ topi che utilizzano fibre di von Frey quantificare allodinia tattile nel tempo in risposta ad una singola infezione con batteri dell'UPEC.

Protocollo

1. Preparazione per l'inoculo batteri mouse

Devono essere effettuata in condizioni asettiche.

1. Prendere una 17 x 100 provette di polipropilene mm con tappi e aggiungere 3 ml di brodo fresco Luria (LB) media. Con punte autoclave, prendere un po 'congelato stock in glicerolo batteri del ceppo CP1 ² e trasferire una piccola quantità della cultura nella provetta contenente il supporto LB. Sostituire il tappo del tubo in modo che l'ossigeno è ancora in grado di entrare nel tubo - la cultura ha bisogno di crescere in condizioni aerobiche. Tubo a 37 ° C in un incubatore agitazione a 220 rpm overnight.
2. I....

Risultati

Abbiamo esaminato topi NOD / ShiLtj e maschi C57BL/6J per la presenza di dolore cronico dopo infezione batterica. Topi maschi (5 a 7 settimane di età) sono stati instillati con soluzione salina o batteri nell'uretra (Figura 1). Stimolazione meccanica della zona pelvica con von Frey filamenti di soluzione salina-instillato topi C57BL/6J e UPEC topi infettati C57BL/6J portato ad una risposta in frequenza che non è cambiato durante i 28 giorni di corso dell'esperimento (Figura 1).

Discussione

Infezione della prostata mouse con UPEC consente la modellazione in vivo di eventi che possono essere coinvolte nella patogenesi della prostatite batterica, CP / CPPS o come un evento predisponente infiammazione cronica. I metodi descritti per la preparazione di batteri e instillazione pareggio su un vasto corpo di letteratura sui modelli UPEC nelle infezioni del tratto urinario femminile ^7,14. Il modello dispone di ampia applicabilità per studiare la patogenesi, la sperimentazione vaccini candidati .......

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Nome del reagente	Azienda	Numero di catalogo
Cultura tubi	BD Falcon	352059
LB Broth Miller	EMD	EM1.10285.0500
Tubi per centrifuga Nalgene	Thermo	3118-0050
Isoflurano	Butler Schein	NDC 11695-6776-1
Catetere ago 30G	Hamilton	91030
PE10 tubi	BD intramedic	427400
Von Frey filamenti	Stoelting	58025-31