Un protocollo per infusioni cronici di glucosio e Intralipid nei ratti è descritto. Questo modello può essere utilizzato per studiare l'impatto di un eccesso di nutrienti in funzione degli organi e dei parametri fisiologici.
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Articolo metodologico
Un modello del Chronic Infusion nutrienti nel ratto
In questo articolo
Sommario
Abstract
Esposizione cronica a livelli eccessivi di nutrienti è postulata a pregiudicare la funzione di diversi organi e tessuti e per contribuire allo sviluppo delle molte complicazioni associate con l'obesità e la sindrome metabolica, compreso il diabete di tipo 2. Per studiare i meccanismi con cui livelli eccessivi di glucosio e acidi grassi influenzano la beta pancreatiche cellule e la secrezione di insulina, abbiamo stabilito un modello infusione di sostanze nutrienti cronica nel ratto. La procedura consiste di cateterizzazione della vena giugulare destra e sinistra arteria carotide in anestesia generale; consentendo un periodo di recupero di 7 giorni; collega i cateteri alle pompe utilizzando una girevole e sistema di contrappesi che consente all'animale di muoversi liberamente nella gabbia; ed infondendo glucosio e / o Intralipid (un'emulsione di olio di soia che genera una miscela di circa 80% unsaturated/20% di acidi grassi saturi quando infuso con eparina) per 72 hr. Questo modello offre diversi vantagGES, compresa la possibilità di modulare finemente i livelli target di glucosio circolante e di acidi grassi, la possibilità di co-infusione composti farmacologici, e il lasso di tempo relativamente breve rispetto a modelli alimentari. Può essere usato per esaminare i meccanismi della disfunzione nutrienti indotta in una varietà di organi e testare l'efficacia dei farmaci in questo contesto.
Introduzione
Livelli cronicamente elevati di glucosio e lipidi in circolo sono state proposte per contribuire alla patogenesi del diabete di tipo 2 alterando la funzione dei vari organi implicati nel mantenimento dell'omeostasi del glucosio compreso, ma non limitato a, il pancreas cellule beta (recensione in 1). Le ipotesi postula glucotossicità che l'iperglicemia cronica aggrava il difetto delle cellule beta che ha dato origine alla iperglicemia, in primo luogo, creando così un circolo vizioso e contribuendo al deterioramento del controllo glicemico nei pazienti con diabete di tipo 2. Allo stesso modo, l'ipotesi glucolipotoxicity propone che aumenti concom....
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Protocollo
Sommario: La procedura consiste cateterizzazione della vena giugulare destra e sinistra arteria carotide in anestesia generale; consentendo un periodo di recupero di 7 giorni; collega i cateteri alle pompe utilizzando una girevole e sistema di contrappesi che consente all'animale di muoversi liberamente nella gabbia; e infondendo glucosio e / o Intralipid (un'emulsione di olio di soia che genera una miscela di circa 80% unsaturated/20% di acidi grassi saturi quando infuso con eparina 9) per 72 hr.
1. Canulation della Vena giugulare destra e l'arteria carotide sinistra
- Sterilizzare gli str....
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Risultati
Su una serie di 42 ratti che hanno subito un intervento chirurgico, 5 ratti sono stati persi durante il periodo post-operatorio e 1 ratto è stato perso durante l'infusione, con un tasso complessivo di successo del 86%. Il peso corporeo medio dei 37 ratti che sono stati poi infuse era 608 ± 5 g prima dell'intervento e 588 ± 6 g al di iniziare l'infusione (media ± SE, n = 37, p <0,0001 per paired t-test). I seguenti risultati rappresentativi sono stati ottenuti in due gruppi: infusione. Saline (SAL), e gluc.......
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Discussione
Sebbene un certo numero di studi precedenti hanno impiegato infusioni cronici di glucosio (ad esempio 10-15) o lipidi (ad esempio 16,17) nei roditori, a nostra conoscenza l'infusione combinata di entrambi i carburanti è stato riportato soltanto nei topi 18. Il modello di infusione cronica qui presentato offre diversi vantaggi per studiare gli effetti sulla eccesso di nutrienti su una varietà di funzioni biologiche nei ratti. In primo luogo, esso non comporta roditor.......
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Dichiarazioni
Vincent Poitout è co-fondatore di contratti di ricerca e ha ricevuto da Bêtagenex Inc., un'organizzazione di ricerca a contratto, che offre il modello di infusione presentato in questo articolo come un servizio commerciale.
Ringraziamenti
Questo lavoro è stato sostenuto dal National Institutes of Health (R01DK58096 a Vincent Poitout). Vincent Poitout detiene il Canada Research Chair in diabete pancreatico e funzione delle cellule beta. Bader Zarrouki ricevuto borse di studio post-dottorato da Merck e Eli Lilly. Ghislaine Fontes è stato sostenuto da una borsa di studio post-dottorato della Canadian Diabetes Association.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Soluzione salina 0,9% | BD | JB1324 | |
| Destrosio 70% | McKesson | ||
| Intralipide 20% | Fresenius Kabi | JB6023 | |
| Metricide (Glutaraldeide 2,6%) | Metrex | 11-1401 | |
| Eparina Sodica 10.000 USP u/ml | PPC | ||
| Carprofene | Metacam | ||
| Glicopirrolato | Sandoz | ||
| Isoflurano | Abbott | ||
| Cloesadina 2% | |||
| Alcool 70% | |||
| Iodio | |||
| PE-50 | BD | 427411 | |
| CO-EX T22 | Instech Solomon | BCOEX-T22 | |
| Connettore 22G | Instech Solomon | SC22/15 | |
| Girevole 22G | Instech Solomon | 375/22PS | |
| Connettore a Y 22G | Instech Solomon | ||
| Contrappeso e braccio | Instech Solomon | CM375BP | |
| 23 G aghi smussati | Instech Solomon | LS23 | |
| 23 G perni di canulazione | Instech Solomon | SP23/12 | |
| Lacci (12 pollici) | Lomir | RT12D | |
| Giacche per infusione | Lomir | RJ01, RJ02, RJ03, RJ04 | |
| (SM-XL) | |||
| Pezzo di fissaggio | Lomir | RS T1 | |
| Siringa da 60 ml | BD | 309653 | |
| Siringa da 1 ml | BD | 309602 |
Riferimenti
- Poitout, V., Robertson, R. P. Glucolipotoxicity: fuel excess and beta-cell dysfunction. Endocr. Rev. 29, 351-366 (2008).
- Poitout, V., et al. Glucolipotoxicity of the pancreatic beta cell. Biochim. Biophys. Acta. 1801, 289-298 (2010).
- Unger, R. H.
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Ristampe e permessi
