Determinazione di svuotamento gastrico con un non-invasiva [ 13 C]-ottanoico breath test con acido per gastroparesi inseguimento in femmine di topo NOD LTJ.
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Articolo metodologico
La valutazione di svuotamento gastrico in non-obesi topi diabetici utilizzando un [
In questo articolo
Sommario
Abstract
Gastrico studi svuotamento nei topi sono stati limitati dalla incapacità di seguire i cambiamenti di svuotamento gastrico, nello stesso animale, poiché le tecniche più comunemente utilizzate richiedono l'uccisione degli animali e il recupero post-mortem del 1,2 pasto. Questo approccio evita studi longitudinali per determinare le variazioni di svuotamento gastrico con l'età e la progressione della malattia. Il comunemente usato [13 C]-ottanoico breath test con l'acido per l'uomo 3 è stato modificato per l'uso nel topo e nel ratto 4-6 7 e abbiamo precedentemente dimostrato che questo test è affidabile e sensibile alle variazioni di svuotamento gastrico in risposta ai farmaci e durante progressione di malattia diabetica 8. In questo video di presentazione il principio e l'attuazione pratica di questo test modificato è spiegato. Come nel precedente studio, i topi NOD LTJ vengono utilizzati, un modello di diabete di tipo 1 9. Una quota di questi topi sviluppano i sintomi di gastroparesi, una complicazione di Diabetees caratterizzata da ritardato svuotamento gastrico senza ostruzione meccanica dello stomaco 10.
Questo documento dimostra come addestrare i topi per i test, come preparare il pasto di prova e ottenere 4 ore di dati di svuotamento gastrico e come analizzare i dati ottenuti. L'analizzatore isotopo di carbonio utilizzati nel presente studio è adatto per il campionamento automatico dei campioni di aria da un massimo di 12 topi contemporaneamente. Questa tecnica permette di follow-up longitudinale di svuotamento gastrico da grandi gruppi di topi con diabete o altre malattie di lunga durata.
Introduzione
Questo manoscritto descrive le considerazioni tecniche e metodologiche implicate nella misurazione non invasiva di svuotamento gastrico nei topi. Seguendo il protocollo qui descritto, gli investigatori in modo affidabile e riproducibile seguire le modifiche di svuotamento gastrico a causa dello sviluppo della malattia, studiare l'impatto di agenti farmacologici sullo svuotamento gastrico e seguire la risposta di svuotamento gastrico per il trattamento di malattie sottostanti o difetti 6,8, 11,12. In precedenti pubblicazioni, l'applicazione di 13 C test di respiro acido ottanoico ha dimostrato di essere un modo utile per misurare svuotame....
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Protocollo
1. Formazione e assuefazione dei Topi
- Prima dell'analisi, mettere tutti i topi nelle camere di prova per 2-4 ore con flusso d'aria costante, al fine di abituarli alle condizioni di prova. Questo riduce notevolmente i livelli di stress che altrimenti potrebbero causare il rilevamento aberrante di ritardato svuotamento gastrico. Trattare i topi stesso modo se l'esperimento svuotamento gastrico è in esecuzione. Preparare il tuorlo d'uovo (vedi oltre), senza l'aggiunta di acido ottanoico e alimentare 0,2 g per ogni mouse.
- Ripetere questo processo fino a quando i topi sono sufficientemente formati (in genere 2-3 volte). I topi sono....
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Risultati
A dati rappresentativi indicati da tre topi diverse è mostrato in Figura 2. Il grafico nero rappresenta i punti dati di un mouse con svuotamento gastrico normale. Essa mostra la frazione di 13 C che viene recuperato in aria espirata espressa come percentuale della dose somministrata per ora espressa come funzione di tempo. La curva blu è da un topo con un accelerato svuotamento gastrico con un valore di mezzo T di 40 min e la curva rossa è da un mouse con svuotamento gastrico ritardato con un.......
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Discussione
La tecnica qui descritta permette di ripetuti e non invasivo per la misurazione in vivo di svuotamento gastrico solido nei topi. Questo sistema ha il vantaggio che gli animali non sono trattenuti nella camera di misura, permettendo loro di muoversi e ruotare liberamente. Dal momento che questo è un ambiente familiare, i topi hanno ancora bisogno di essere addestrati e abituati alle camere di prova per prevenire gli effetti dello stress sullo svuotamento gastrico. In generale, si assume i dati svuotamen.......
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Dichiarazioni
Gli autori dichiarano di non avere conflitto di interessi finanziari.
Ringraziamenti
Questa pubblicazione video è stato reso possibile da un finanziamento del National Institute of Diabetes and Digestive e malattie renali (NIDDK) per il programma Progetto "Patobiologia del sistema enterico" Grant DK 68055. Christopher T. Creedon è stato sostenuto dal Programma Mentori pubblico Rochester scuole.
Ringraziamo il Sig. Gary Stoltz per l'assistenza tecnica, la signora Kristy Zodrow segreteria per l'assistenza e il Dr. Douglas Baer da Los Gatos Research, Inc (Mountain View, CA).
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| NOME | AZIENDA | CAT NUMERO | COMMENTI |
| Una fonte di alimentazione d'aria costante, il flusso e composizione | centrale di alimentazione aria nella struttura di ricerca | ||
| 130 ml di campionamento camera che dispone di aria in entrata, di uscita dell'aria, l'apertura e la gestione alimentare Tubi di plastica per l'alimentazione pneumatica | In casa costruita | ||
| Acido ottanoico | Cambridge isotopo laboratori (Andover, MA) | CLM-293-1 | |
Per preparare il pasto uovo:
| Ogni fornitore | Cercate diessere coerente con il fornitore uovo poiché il contenuto nutrizionale e appetibilità delle uova può influenzare lo svuotamento gastrico e l'ingestione del pasto | |
| Biossido di carbonio isotopo analizzatore | Los Gatos Research Inc. (Mountain View, CA) |
Riferimenti
- Yeung, C. K., McCurrie, J. R. A simple method to investigate the inhibitory effects of drugs on gastric emptying in the mouse in vivo. J. Pharmacol. Toxicol. Methods. 45, 235-240 (2001).
- Osinski, M. A., Seifert, T. R., Cox, B. F., Gintant, G. A.
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Ristampe e permessi
