이 프로토콜은 곰팡이 entomopathogen을 소개하는 두 접종 방법을 보여줍니다<em> Beauveria bassiana</em> 일반 콩에 endophyte로 (<em> Phaseolus vulgaris</em>), endophytic 생물학적 방제의 후속 평가에 대한 준비 인치
Beauveria bassiana는 endophytically 식물을 이식 할 수있는 능력을 곰팡이 entomopathogen입니다. endophyte, B.로 bassiana는 herbivory과 질병으로부터 식물을 보호하는 역할을 재생할 수 있습니다. 이 프로토콜은 B.를 설정하는 두 가지 접종 방법을 보여줍니다 endophytic 생물학적 방제의 후속 평가에 대비 일반 콩 (Phaseolus vulgaris)에 endophytically bassiana. 식물은 B.를 받고 2 주 후면에 표면 소독 종자에서 재배 10 8 conidia / ML (또는 물)의 bassiana 치료는 잎 스프레이 또는 토양 물약으로도 적용했습니다. 2 주 후에 식물 수확을하고 있으며 잎, 줄기 및 뿌리는 endophytic 곰팡이 식민지을 평가하는 샘플입니다. 이 경우, 샘플은 개별적으로 여러 부분으로 절단, 소독 표면되며, 20 일 동안 감자 덱스 트로 오스 한천 미디어에서 incubated. 미디어로 곰팡이 성장을 관찰 할 때마다 2-3일 검사를식물 섹션과 sociated와 B의 발생을 기록 bassiana는 endophytic 식민지의 범위를 측정합니다. 접종의 성공 분석은 B.의 발생을 비교 트리트먼트와 컨트롤에서 특정 식물의 부분에서 bassiana (예 : 잎, 줄기 또는 뿌리). 접종 방법뿐만 아니라, 실험의 구체적인 결과가 대상 작물 종이나 다양한에 따라 달라질 수 있습니다, 곰팡이 entomopathogen 종 변형 또는 사용 분리 및 식물의 성장 조건.
곰팡이 entomopathogens는 mycopesticides 1로 상당한 잠재력을 지닌 곤충 집단의 중요한 조절기입니다. 최근에, 그러나, 곰팡이 entomopathogens이 endophytes 모두 자연스럽게 다양한 접종 방법 2 반응으로 발생하는 표시되었습니다. endophytic 곰팡이 entomopathogens의 생태 기능은 대부분 알 수없는 남아 있지만, 일부 연구는 식물의 성장 3,4, herbivore 저항 5-8, 질병 저항 9,10에서 그들을 연루 있습니다. 여기에 제시된 방법의 전반적인 목적은 endophytic 생물학적 방제의 후속 평가에 대한 준비, endophyte로 곰팡이 entomopathogen을 소개하는 것입니다.
Beauveria bassiana (Balsamo) Vullemin (Ascomycota : Hypocreales)는 최고의 연구 endophytic 곰팡이 entomopathogen 5-9,11-19이며, 상업 mycopesticide로 사용할 수 있습니다. 접종 방법은 확립 테스트 <em> B. endophyte으로 bassiana는 토양 drenches 14,17, 종자 코팅 18 immersions 14 잔뿌리 드레싱 13,15, 루트와 rhizome immersions 11,16,18, 줄기 주사 17, 잎 스프레이 14,17,20와 꽃 스프레이 19 등이 있습니다. 이러한 방법을 사용하여, 연구자들은 B.를 도입 한 bassiana 바나나 11, 콩 7, 카카오 13, 커피 17, 옥수수 7면 7, 날짜 야자 12, 주트 사람 21 아편 양귀비 20, 호박 7 radiata 소나무 18 수수 14, 토마토 7 밀 7에. 최근 증거 endophytic B.를 제안 bassiana는뿐만 아니라 arthropod 해충 5-7,22-27에서 식물을 보호 할 수있는 잠재력을 가지고 있지만, 일부 식물 병원균 9.
일반 콩 (Phaseolus vulgaris의)는 해충에 가장 취약한 작물 사이에 위및 질병. 그것은 그의 공격 지역 28에서 가장 제한 콩 생산 요소로 생각됩니다 400 개 이상의 해충 200 병원균에 의해 영향을받을 수 있습니다. 따라서, 일반적으로 콩은 B.에 의해 endophytic 생물학적 방제의 전체 스펙트럼을 조사하는 훌륭한 모델 작물 될 수 있습니다 bassiana. 이 방향으로 첫 번째 단계로,이 글은 일반적인 콩의 endophyte로 B.bassiana을 소개 접종 방법으로 잎 스프레이와 토양 drenches에 대해 설명합니다.
많은 요소가 endophyte으로 곰팡이 entomopathogen를 구축 할 수있는 실험의 구체적인 결과에 영향을 미칠 수있다. 결과는 접종 방법이 그 중 하나입니다 보여줍니다. 과 실험 생물 요소는 작물 종이나 개량 품종 선택하고 곰팡이 entomopathogen 종 변형을 포함하거나 사용 격리. 조작 고려해야 할 다른 요소는 inoculum의 농도, 예방 접종 동안 식물의 연령, 식물의 성장 조건이 포함되어 있습니다.
이 곰팡이 entomopathogen 14,17,18,21하여 체계적 식물의 식민지가 발생하는 접종 방법에 적합 할 것입니다. 대신, 접종 방법은 현지 식민지의 특정 패턴을 선호하는 경향이있는 것 같습니다. 토양 drenches 루트 식민지 17 선호하는 반면 커피에서 예를 들어, 잎 스프레이는 잎 식민지를 선호. 우리는 일반적으로 빈에서 동일한 패턴을 발견했다. 결국, 접종 방법의 선택은해야합니다아마 대상 herbivore 또는 식물 병원체의 틈새 시장을 일치 공장 내에서 endophyte의 의도 위치별로 안내.
미디어 문화에 따라 비록 일반적으로 사용되는, endophyte 감지 및 정량화는 비용이 많이 드는 어려운 및 오류 발생하기 쉬운 수 있습니다. 예를 들어, 10800 식물의 부분 (1,800 배양 접시에 도금)의 총 B.를 최적화하는 실험에서 평가 된 바나나 16 bassiana 예방 접종. 이 중에 4,496 섹션은 putative B.에 의해 식민지되었습니다 bassiana는 등 주로 식민지의 형태에 의해 식별. 분명, 각 식민지의 종의 미세 인증은 바람직하지만 unaffordable 단계이었습니다. 한편, 1176 섹션은 다른 곰팡이에 의해 식민지되었으며 폐기 및 데이터 (16) 누락으로 처리되었다. 확률은 B. 그러나, 존재 bassiana는 가난한 경쟁이나 성장 속도가 느린이었고, 결국 그 섹션에서 부상 할 수있는 경우llowed 충분한 시간. 따라서, 미디어 문화에 따라 endophyte 감지 방법은 잘못된 반응과 거짓 네거티브 필름이 적용됩니다. 따라서, 예를 들어, 더 신뢰할 수있는 탐지 및 정량화 방법의 개발은 중합 효소 연쇄 반응 (PCR) assays 20,21,24에 따라 사람들은 잘 정당화된다.
접종 실험의 궁극적 인 목표는 herbivory 및 / 또는 질병에 대한 내구성이 전신 저항을 제공하는 효율적인 치료를 개발해야합니다. 그럴듯하지만 아직까지는 untested, 가설은 endophytic 식민지의 범위는 endophyte로 인한 저항의 범위와 긍정적 인 상관 관계를해야한다는 것입니다. 접종 방법을 수정 한 후 자연 다음 단계는 않으므로,이 상관 관계를 조사 할 수 있습니다. 여러 비디오 프로토콜은 연구자 대상 해충이나 병원균 29-31에 적합한 저항 분석을 설계 할 수 있습니다. 궁극적으로, 그것은 inocula의 성공을 결정합니다 어떤이 검정입니다기 방법, 그리고 endophytic 생물학적 방제를위한 관련 가능성.
The authors have nothing to disclose.
생산 및 실험 작업은 여기 Reynaldo Pareja의 헌신적이고 열정적 인 도움을 반영 발표했다. 콜롬비아의 행정 과학학과, 기술과 혁신 (Colciencias)와 빌 & 그랜드 도전의 탐험 사업을 통해 멜린다 게이츠 재단의 교부금으로 운용.
REAGENTS | |||
Name of Reagent/Material | Company | Catalog Number | |
Mycotrol SE | Laverlam | 4167 | |
Noble agar | Sigma | A5431-250G | |
Penicillin G sodium salt | Sigma | P3032-25MU | |
Petri dish (100 x 15 mm) | Fisher | 08-757-12 | |
Petri dish (60 x 15 mm) | Fisher | 08-757-13A | |
Potato dextrose agar | Difco | 213400 | |
Regular bleach (NaOCl) | CLOROX | N/A | |
Streptomycin sulfate salt | Sigma | S6501-25G | |
Tetracycline | Sigma | T3258-25G | |
Triple quince (NPK) | ABOCOL | N/A | |
Triton X-100 | Sigma | X-100 | |
EQUIPMENT | |||
Biological safety cabinet | NuAire | NU-425-600 | |
Hemocytometer | Fisher | 02-671-10 | |
Leica DM LB microscope | Leica | N/A |