Drosophila è emersa come sistema modello significativo per la dissezione delle basi cellulari e molecolari delle risposte comportamentali all'alcool. Qui vi presentiamo un protocollo per la raccolta di dati di sensibilità alcol in un contesto circadiano che può essere facilmente applicato ad altri esperimenti ed è particolarmente adatto per la ricerca di laurea.
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Articolo metodologico
Flybar: Amministrazione alcol a Flies
In questo articolo
Sommario
Abstract
Moscerini della frutta (Drosophila melanogaster) sono un modello stabilito sia per la ricerca di alcol e di biologia circadiana. Recentemente, abbiamo dimostrato che l'orologio circadiano modula alcool sensibilità, ma non la formazione di tolleranza. Qui, descriviamo il nostro protocollo in dettaglio. L'alcol viene somministrato alle mosche con flybar. In questa configurazione, vapori di alcol saturo viene miscelato con aria umidificata in set proporzioni, e somministrato alle mosche in quattro tubi contemporaneamente. Le mosche sono allevati in condizioni standardizzate al fine di minimizzare la variazione tra le repliche. Tre giorni di età in linea di differenti genotipi o trattamenti vengono utilizzati per gli esperimenti, preferibilmente abbinando mosche di due diversi punti di tempo (ad esempio, CT 5 e CT 17) rendendo possibili confronti diretti. Durante l'esperimento, mosche sono esposti per 1 ora alla percentuale prestabilita del vapore di alcool e il numero di mosche che esporre la perdita del riflesso di raddrizzamento (Lorr) o sedzione sono conteggiati ogni 5 min. I dati possono essere analizzati utilizzando tre differenti approcci statistici. Il primo è quello di determinare il momento in cui il 50% delle mosche hanno perso il loro riflesso di raddrizzamento e utilizzare un analisi della varianza (ANOVA) per determinare se esistono differenze significative tra i punti temporali. Il secondo è quello di determinare le mosche percentuali che mostrano Lorr dopo un determinato numero di minuti, seguita da un'analisi ANOVA. L'ultimo metodo è quello di analizzare l'intera serie di volte con statistica multivariata. Il protocollo può essere utilizzato anche per esperimenti non circadiani o confronti tra i genotipi.
Introduzione
Drosophila melanogaster dimostrare risposte comportamentali bifasico all'alcool 1 che sono analoghi a risposte umane a questo farmaco 2,3. Dopo l'esposizione iniziale a basse concentrazioni di alcol, mosche mostra un aumento dell'attività locomotoria, sostituito da una mancanza di coordinazione motoria, la perdita del controllo posturale e raddrizzamento riflessi (perdita del riflesso di raddrizzamento: Lorr), e la sedazione (completa mancanza di attività motoria in risposta alla stimolazione meccanica) come l'esposizione all'alcol progredisce 4-9. L'orologio circadiano endogeno è un modulatore di fort....
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Protocollo
1. Assemblea della flybar
Motivazione e Panoramica: Il sistema è progettato per amministrare percentuali controllate di vapore di alcol per le mosche. Nota: La figura 1 fornisce una panoramica schematica del flybar set-up come descritto di seguito in tre fasi (assemblaggio del flusso d'aria, set-up della alcol e bottiglie d'acqua, e l'assemblaggio delle fiale di osservazione). In breve, un flusso d'aria costante è diviso in due frazioni che vengono gorgogliare attraverso alcool e acqua, rispettivamente mescolati e somministrati a 4 flaconcini di osservazione.
- Assemblea della Airflow
- Col....
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Risultati
Modulazione circadiano di alcol sensibilità con la Lorr 50% come marcatore.
Un esempio rappresentativo che mostra modulazione circadiano in alcool sensibilità durante il giorno è presentato in Figura 2. Lorr stata misurata a sei punti di tempo durante il 2 ° giorno di DD in Canton-S e il 50% Lorr stato determinato per ciascun punto di tempo. L'analisi ha dimostrato un effetto significativo del momento della giornata (ANOVA: F 5,45 = 7.39, p.......
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Discussione
I costi di abuso di alcol e l'alcolismo per la società è enorme, sia in termini di costi umani ed economici 29 30,31. Drosophila come modello offre un sistema veloce e versatile per esaminare rapidamente le risposte comportamentali di un gran numero di individui e come tale è stato ampiamente utilizzato sia per l'alcol 5,7,32-34 e ricerca circadiano 35-37.
Qui, abbiamo descritto un protocollo semplice per la somministrazione controllata di va.......
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Dichiarazioni
Gli autori dichiarano di non avere interessi finanziari in competizione.
Ringraziamenti
Finanziamento per questa ricerca è stato fornito da un programma in Neuroscienze Award dalla Florida State University College of Medicine e il sostegno del Dipartimento di Scienze Biologiche a FSU. Il finanziamento aggiuntivo è stato fornito da un Grant-in-Aid dal Fondo di Ricerca di alcol Beverage Produttore.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Alcool 190 prova | Vari | ||
| Aeratore | Negozio | Usiamo Whisper 60 | |
| Tubo in silicone 1/8 " | VWR | 408060-0030 | |
| 120° Connettore a Y | VWR | 82017-256 | |
| Sganciatori rapidi | VWR | 46600-048 | |
| Morsetti per tubi in plastica Prodotti | Bell-art | 132250000 | O questo o il prossimo |
| Regolatore d'aria in miniatura | McMaster-Carr | 8727K11 | O questo o il precedente Staffa |
| di montaggio del regolatore d'aria in miniatura | McMaster-Carr | 9891K66 | |
| Misuratore di portata Gilmont misura 12 | VWR | 29895-242 | |
| Clip per attrezzi | McMaster-Carr | 1722A43 | Per contenere i misuratori di portata |
| Fiala | VWR | 89092-722 | |
| Tappo in gomma con due fori | VWR | 59585-186 | Si adatta a fiale |
| tubi di vetro Pyrex da 5 mm | Trikinetics | PGT5x65 | Si adatta meglio al tappo precedente |
| Nastro in teflon | Ferramenta | Per ottenere una perfetta aderenza nei tappi, se necessario | |
| Tappo in gomma con due fori | VWR | 59582-122 | Adatto alle nostre bottiglie |
| Pipette di vetro usa e getta | VWR | 53283-768 | Tagliato a misura e piegato mediante riscaldamento |
| Rete di nylon molto fine | VWR | Varie | |
| lampadine da 15 watt Negozio di | ferramenta | Luce rossa | |
| dall'altoFiltri | Luce rossa dall'alto | ||
| Mini torce elettriche con filtri rossi | Mag-light |
Riferimenti
- Linde, K., Lyons, L. C. Circadian modulation of acute alcohol sensitivity but not acute tolerance in Drosophila. Chronobiol. Int. 28, 397-406 (2011).
- Kaun, K. R., Azanchi, R., Maung, Z., Hirsh, J., Heberlein, U. A Drosophila model for alcohol reward. Nat Neurosci. 14
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Ristampe e permessi
